肠出血性大肠杆菌O157∶H7鞭毛可变区基因片段的克隆、表达与免疫原性

作者：张雪寒; 何孔旺; 赵攀登; 栾晓婷; 叶青; 温立斌; 李彬; 王小敏; 郭容利; 倪艳秀; 周俊明; 俞正玉; 茅爱华; 吕立新

来源：江苏农业学报, 2011, 27(05): 1021-1025.

DOI：10.3969/j.issn.1000-4440.2011.05.019

• 肠出血性大肠杆菌O157∶H7
• flic基因
• 表达
• 小鼠

肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli,EHEC)O157∶H7是食源感染的人兽共患病原菌。鞭毛蛋白(H7)是EHEC O157∶H7重要的毒力因子,其编码基因为flic。该研究在体外克隆和表达flic基因的可变区,并检测其免疫原性,旨在为EHEC O157∶H7疫苗的研制提供候选抗原。PCR扩增到flic基因538～1 483bp的可变区,成功克隆入冷诱导表达载体pColdⅠ中,构建重组表达质粒。重组菌BL21(pCold I-flic)0.5 mmol/LIPTG过夜诱导,SDS-PAGE和Western blotting进行鉴定。Balb/c小鼠免疫和攻毒试验评价重组H7蛋白的免疫原性。结果显示:H7基因(flic)片段945 bp在pColdⅠ中成功表达,大小为31 000,能够与天然EHEC O157∶H7全抗血清反应;免疫小鼠存活率可以达到80%,而非免疫小鼠存活率仅为20%;免疫组粪便排菌数量显著低于对照组(P<0.05)。以上结果说明,H7鞭毛的可变区与菌体黏附密切相关,并且其诱导产生的抗体具有一定的抑制黏附作用,可以作为亚单位疫苗研制的候选抗原,在EHEC O157∶H7早期黏附时,协同Ⅲ型分泌系统蛋白降低菌体在肠道内的黏附。

• 单位
  江苏省农业科学院; 农业部