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摘要
目的观察不同浓度华蟾素联合吉非替尼对人非小细胞肺腺癌细胞株A549增殖、凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法将A549细胞分为吉非替尼组、华蟾素组、联合药物组和对照组,吉非替尼组分别加入1、5、10、20、40μmol/L的吉非替尼,记为A1、A2、A3、A4、A5组;华蟾素组分别加入0.005、0.01、0.05、0.1、0.5 mg/mL的华蟾素,记为B1、B2、B3、B4、B5组;联合药物组分别加入1μmol/L吉非替尼+0.005 mg/mL华蟾素、5μmol/L吉非替尼+0.01 mg/mL华蟾素、10μmol/L吉非替尼+0.05 mg/mL华蟾素、20μmol/L吉非替尼+0.01 mg/mL华蟾素、40μmol/L吉非替尼+0.5 mg/mL华蟾素,记为C1、C2、C3、C4、C5组;对照组加入等量DMSO。培养24、48、72 h时,采用MTT法观察各组细胞增殖能力(以OD值表示细胞增殖能力),采用流式细胞术测算A5、B5、C5和对照组细胞凋亡率,采用Western Blotting法检测A5、B5、C5和对照组细胞c-met蛋白。结果 A1、A2、A3、A4、A5组细胞培养24 h时的OD值分别为0.410±0.030、0.371±0.037、0.322±0.010、0.284±0.025、0.196±0.020,B1、B2、B3、B4、B5组分别为0.463±0.021、0.454±0.017、0.472±0.013、0.460±0.009、0.452±0.028,C1、C2、C3、C4、C5组分别为0.412±0.016、0.359±0.023、0.306±0.035、0.249±0.020、0.174±0.024,对照组为0.458±0.025;其中,吉非替尼组、联合药物组与对照组相比,P均<0.05;吉非替尼组、联合药物组内各浓度组间相比,P均<0.05;C2、C3、C4、C5组与相同浓度的A2、A3、A4、A5组和B2、B3、B4、B5组相比,P均<0.05。A1、A2、A3、A4、A5组细胞培养48 h时的OD值分别为0.541±0.010、0.453±0.016、0.396±0.011、0.344±0.014、0.261±0.011,B1、B2、B3、B4、B5组分别为0.688±0.035、0.687±0.018、0.677±0.018、0.641±0.036、0.556±0.019,C1、C2、C3、C4、C5组分别为0.526±0.033、0.431±0.019、0.376±0.027、0.296±0.022、0.209±0.027,对照组为0.684±0.019;其中,吉非替尼组、B3组、B4组、B5组、联合药物组与对照组相比,P均<0.05;吉非替尼组、华蟾素组、联合药物组内各浓度组间相比,P均<0.05;联合药物组与相同浓度的吉非替尼组、华蟾素组相比,P均<0.05。A1、A2、A3、A4、A5组细胞培养72 h时的OD值分别为0.755±0.021、0.590±0.024、0.499±0.023、0.353±0.022、0.267±0.005,B1、B2、B3、B4、B5组分别为1.088±0.176、0.990±0.085、0.849±0.038、0.758±0.050、0.704±0.041,C1、C2、C3、C4、C5组分别为0.714±0.033、0.481±0.036、0.383±0.026、0.310±0.006、0.232±0.011,对照组为1.089±0.190;吉非替尼组、华蟾素组、联合药物组与对照组相比,P均<0.05;吉非替尼组、华蟾素组、联合药物组内各浓度组间相比,P均<0.05;联合药物组与相同浓度的吉非替尼组、华蟾素组相比,P均<0.05。各组细胞培养24、48、72 h时,相同浓度组间相比,P均<0.05。A5、B5、C5、对照组细胞培养48 h时的凋亡率分别为14.37%±0.48%、9.76%±0.37%、35.01%±0.62%、4.13%±0.65%,组间相比,P均<0.01。A5、B5、C5、对照组细胞中c-met蛋白的相对表达量分别为0.477±0.034、0.629±0.007、0.332±0.010、0.738±0.023,组间相比,P均<0.001。结论与单独应用吉非替尼或华蟾素相比,华蟾素联合吉非替尼可抑制人非小细胞肺腺癌细胞株A549等增殖,促进其凋亡;华蟾素联合吉非替尼可通过下调c-met蛋白表达来发挥抗肿瘤作用。
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