沉默调节蛋白6对胶质母细胞瘤抑制机制

作者：倪冬冬; 凌园果; 龙妮娅; 姜利时; 滕炜; 杨宇石; 出良钊^*

来源：中华肿瘤防治杂志, 2023, 30(13): 773-781.

DOI：10.16073/j.cnki.cjcpt.2023.13.02

• 沉默调节蛋白6
• 缺氧
• 糖酵解
• 胶质母细胞瘤
• 细胞增殖
• 替莫唑胺耐药

目的 探讨沉默调节蛋白6(SIRT6)在胶质母细胞瘤(GBM)疾病进展中的作用。方法 将GBM细胞U87MG分为2组，分别在常氧和缺氧条件下培养，蛋白质印迹法分析SIRT6表达。采用慢病毒感染分别构建SIRT6过表达及沉默的U87MG细胞，CCK-8实验检测过表达和沉默SIRT6后U87MG细胞活性的变化，并用蛋白质印迹法检测对糖酵解途径的影响。最后，在SIRT6过表达及沉默的U87MG细胞中加入替莫唑胺(TMZ),CCK-8实验检测过表达和沉默SIRT6的U87MG细胞对TMZ的药物敏感性，蛋白质印迹检测蛋白表达的变化，流式细胞仪检测细胞凋亡水平。结果 缺氧实验：与常氧组细胞比较，缺氧组SIRT6受到抑制，差异有统计学意义，t=11.920,P=0.000 3;而诱导转录因子1α(HIF1α;t=9.888,P=0.000 6)、乳酸脱氢酶(LDHA;t=11.890,P=0.000 3)、肌肉丙酮酸激酶同工酶2(PKM2;t=12.060,P=0.000 3)及葡萄糖转运体1(GLUT1;t=18.190,P<0.000 1)蛋白表达水平上调。细胞活性和糖酵解实验：同OE-NC组比较，OE-SIRT6组细胞活性在第5(t=4.869,P=0.008 2)和7天(t=6.197,P=0.003 4)被抑制；同sh-NC组比较，sh-SIRT6组细胞活性在第5(t=3.066,P=0.037 5)和7天(t=5.017,P=0.007 4)被上调。蛋白质印迹检测结果显示，与OE-NC组比较，OE-SIRT6组抑制HIF1α(P=0.000 3)、LDHA(P<0.000 1)、PKM2(P=0.010 6)和GLUT1(P=0.001 2)蛋白表达；与sh-NC组比较，沉默sh-SIRT6能够上调HIF1α(P<0.000 1)、LDHA(P<0.000 1)、PKM2(P<0.000 1)和GLUT1(P<0.000 1)蛋白表达。OE-SIRT6组细胞葡萄糖摄取量为(0.82±0.21) mmol/g,乳酸产生水平为(0.12±0.03) mmol/g,均低于OE-NC组，P=0.009 0。与sh-NC组比较，sh-SIRT6组细胞的葡萄糖摄取量为(1.34±0.10) mmol/g,乳酸分泌水平为(0.46±0.05) mmol/g,均上调，均P<0.000 1。药物敏感性实验：CCK8实验结果显示，缺氧条件能够上调U87MG细胞在TMZ药物压力下的细胞活性，P=0.013 2。在缺氧背景下，同TMZ组比，过表达SIRT6能够增强TMZ对U87MG细胞的抑制作用，P=0.000 5;而沉默SIRT6能上调细胞对TMZ的抗性作用，P<0.000 1。流式细胞术检测结果表明，同TMZ组(8.59±0.69)%比，OE-SIRT6+TMZ组细胞凋亡率(18.0±2.15)%上调，P=0.002 0;而sh-SIRT6+TMZ组U87MG细胞的凋亡率(1.69±0.96)%下降，P=0.000 5。结论 SIRT6可以通过HIF1α/糖酵解途径抑制GBM U87MG的增殖，促进其凋亡并增强缺氧状态下GBM U87MG对TMZ的药物敏感性，发挥抑癌作用。

• 单位
  贵州医科大学