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摘要
为了同时检测奶牛乳房炎中的6种主要致病菌，本试验分别针对金黄色葡萄球菌的nuc基因、无乳链球菌的ef-tu基因、绿脓杆菌的eta基因、停乳链球菌的16srRNA基因、致病性大肠杆菌的Phoa基因、牛支原体的opp D/F基因设计合成了6对特异性引物。在建立并验证单一PCR的基础上，构建多重PCR反应体系，对其反应体系进行优化，验证了该方法的特异性和敏感性。结果表明，该6重PCR检测方法对奶牛乳房炎的其他病原菌没有特异性扩增，对牛支原体、致病性大肠杆菌、停乳链球菌、绿脓杆菌、无乳链球菌、金黄色葡萄球菌最低检出终浓度分别为1.1×105、1.41×106、1.6×103、3×105、3.8×104和7.3×103拷贝/μL。对采集的宁夏地区98份临床乳房炎病例乳样的检测结果显示：牛支原体、致病性大肠杆菌、停乳链球菌、绿脓杆菌、无乳链球菌、金黄色葡萄球菌的检出率分别为10.2%(10/98)、14.2%(14/98)、14.2%(14/98)、12.2%(12/98)、18.3%(18/98)、18.3%(18/98)。本研究建立的多重PCR检测方法具有良好的特异性及敏感性，可用于奶牛乳房炎6种主要致病菌的检测及流行病学调查。
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