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摘要
目的 探讨Bcl-2小分子抑制剂ABT-737对经肿瘤相关巨噬细胞(TAM)来源外泌体(Exo)处理的卵巢癌细胞自噬性凋亡及干性特征的作用。方法 利用佛波酯(PMA)与重组人白细胞介素-4(IL-4)诱导人外周血单核细胞THP-1为M2型TAM,流式细胞术检测细胞表面巨噬细胞相关标志物表达；差速离心法提取外泌体，透射电镜与纳米粒子追踪技术观察外泌体形态及径粒分布，Western blot检测外泌体标志蛋白表达，Dil结合PKH67染色检测TAM来源外泌体被卵巢癌细胞系SKOV3摄取情况；实验分组为对照组、Exo组、Exo+ABT-737组，采用TAM来源外泌体与ABT-737按照分组处理SKOV3细胞，流式细胞术检测细胞凋亡率，双荧光mRFP-GFP-LC3实验检测细胞自噬水平，Western blot检测细胞自噬相关蛋白(LC3-Ⅱ/LC-3Ⅰ、Beclin-1、p62)与凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2、Cleaved-caspase3)表达，肿瘤细胞成球实验检测细胞干性，Western blot检测肿瘤干细胞相关蛋白(CD133、OCT4、SOX2)表达。结果 经PMA与IL-4诱导后，THP-1细胞形态发生改变，M1型巨噬细胞标记物CD86表达比例降低而M2型巨噬细胞标记物CD206表达比例升高(P<0.05)。分离的颗粒物为球形囊泡，大小均匀，粒径峰值约为140 nm,外泌体标志蛋白Alix、CD63、TSG101表达明显，由此判断成功分离到M2型TAM来源Exo,且其能被SKOV3摄取。与对照组比较，Exo组SKOV3细胞凋亡率减少，GFP与mRFP的荧光斑点减少，细胞内LC3-Ⅱ/LC-3Ⅰ、Beclin-1、Bax及Cleaved-caspase3表达均下调，p62与Bcl-2表达均上调，此外，细胞成球数量增加，CD133、OCT4及SOX2表达均上调，差异均具有统计学意义(P<0.05)。与Exo组比较，Exo+ABT-737组SKOV3细胞凋亡率增加，GFP与mRFP的荧光斑点也增加，细胞内LC3-Ⅱ/LC-3Ⅰ、Beclin-1、Bax及Cleaved-caspase3表达均上调，p62与Bcl-2表达均下调，细胞成球数量减少，且CD133、OCT4及SOX2表达均下调，差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论 ABT-737能够在M2型TAM来源外泌体处理的卵巢癌细胞中发挥促自噬性凋亡的作用，并且可以抑制卵巢癌肿瘤干性特征。
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单位海南医学院; 海南省妇女儿童医学中心; 生命科学学院
