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摘要
目的:采用基因芯片技术研究小分子RNA-146a(miR-146a)促进血管平滑肌细胞增殖的作用靶点并进行验证。方法:原代培养大鼠血管平滑肌细胞,分成mimics组、inhibitor组、control组、sham组,分别体外转染miR-146a mimics(50nmol/L)、miR-146a inhibitor(50 nmol/L)、miR-146a错义链(50 nmol/L)、PBS,Real time PCR测定转染后miR-146a水平,CCK8法检测转染后血管平滑肌细胞增殖情况。采用基因芯片检测inhibitor组和control组基因表达谱,通过生物信息学技术筛选出差异基因和调控的信号通路。对筛选出来的信号通路用Real time PCR和Western blot进行验证。结果:转染48 h后,inhibitor组血管平滑肌细胞的miR-146a水平明显低于control组和sham组(P<0.01),inhibitor组血管平滑肌细胞的OD值明显低于control组、sham组(P<0.05)。通过对基因表达谱分析发现,p53信号通路被miR-146a上调。用Real time PCR和Western blot进行检测发现,p53信号通路中关键分子p53、caspase3、PTEN的mRNA和蛋白水平无明显变化(P>0.05),而mimics组VSMC中cyclin D1的mRNA和蛋白水平增加(与sham相比,P<0.05),inhibitor组VSMC中cyclin D1的mRNA和蛋白水平下降(与sham相比,P<0.05)。结论:miR-146a可能通过上调细胞周期蛋白cyclin D1的表达促进大鼠血管平滑肌细胞的增殖。
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