川陈皮素在体内外模型中对肠干细胞增殖的影响

作者：吴静峰; 郭科男; 张宁; 吴天宇; 周子默; 陆治宇; 王锋超^*; 陈文生^*

来源：陆军军医大学学报, 2023, 45(21): 2195-2205.

DOI：10.16016/j.2097-0927.202309138

• 川陈皮素
• 小肠干细胞
• 小肠类器官
• 细胞增殖
• 在体

目的 探讨在体内外模型中常用有效剂量川陈皮素(nobiletin, NOB)对肠道干细胞的调节作用。方法 构建小鼠结肠癌细胞系MC38的3D培养模型，加入不同浓度NOB,观察克隆死亡和存活。构建小鼠小肠类器官模型，在类器官培养体系中添加不同浓度的NOB,观察类器官的出芽和生长，利用MTT染色后的类器官成像进行面积和吸光值计算。在50、100μmol/L浓度NOB干预体系中不同时间撤掉NOB,观察类器官生长。在50μmol/L浓度NOB处理类器官的体系中分别加入R-spondin1、CHIR99021加强Wnt通路激活信号，观察类器官的生长。对C57/B6J小鼠灌胃不同浓度NOB,连续给药4 d,观察肠道隐窝和绒毛长度比，观察隐窝细胞凋亡，以及隐窝底部干细胞龛中Olfm4/BrdU染色阳性的细胞数量。结果 与对照组相比，50μmol/L NOB即可显著促进肿瘤细胞MC38成球后死亡，显著降低克隆形成率(P<0.001)。与对照组相比，NOB从50μmol/L起可以显著抑制肠类器官的出芽，50～200μmol/L NOB可以显著抑制类器官的生长(P<0.001),并且具有剂量依赖效应；NOB撤药后在50μmol/L时肠类器官生长容易恢复，在100μmol/L时难以恢复到正常水平。增强Wnt通路的激活可以部分挽救NOB对肠类器官的抑制作用。在体给予高于常用浓度的NOB不能诱导肠隐窝细胞凋亡，不影响肠干细胞的数目和增殖，不影响隐窝和绒毛比。结论 NOB具有抑制正常肠干细胞的能力，可能通过调控干细胞相关通路如Wnt发挥作用，但其在在体不能发挥抑制干细胞增殖的效应；这提示NOB在常规浓度应用的安全性，同时提醒对NOB在在体肿瘤模型中发挥的抑制作用需要进行更深入的评估。

• 单位
  第三军医大学; 中国人民解放军陆军军医大学; 基础医学院; 第一附属医院消化内科