雷帕霉素通过调控海马组织富含半胱氨酸61和自噬对狼疮小鼠认知功能的保护作用研究

作者：潘秀虹; 康红丽; 巩奇明; 尤燕舞^*

来源：中华风湿病学杂志, 2022, 26(06): 379-1.

• 西罗莫司
• 富含半胱氨酸蛋白质61
• 自噬
• MRL/lpr狼疮小鼠
• 认知功能

目的探讨雷帕霉素通过调控富含半胱氨酸61(Cyr61)和自噬对狼疮小鼠认知功能的作用机制。方法将MRL/lpr狼疮小鼠随机分为狼疮组和雷帕霉素+狼疮组, 野生型C57BL/6小鼠随机分为正常对照组和雷帕霉素组, 每组6只, 雷帕霉素+狼疮组和雷帕霉素组小鼠采用腹腔注射雷帕霉素(2.0 mg/kg)治疗;狼疮组和正常对照组注射等量二甲基亚砜(DMSO)。Morris水迷宫观察小鼠认知功能变化;蛋白质印迹法检测Cyr61和自噬蛋白程序性死亡受体-1(Beclin-1)、微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)表达;苏木素-伊红(HE)染色观察海马区病理改变;尼氏染色观察海马区神经元和尼氏小体改变;免疫荧光染色检测Cyr61及LC3B在海马区的定位及表达。多组间比较采用单因素方差分析。结果蛋白质印迹法结果显示:与正常对照组[(0.73±0.08), (0.81±0.12), (0.80±0.03)]比较, 狼疮组Cyr61(0.99±0.15)蛋白表达量明显升高(P=0.011), Beclin-1(0.64±0.04)和LC3B(0.54±0.05)蛋白表达量明显降低(P=0.025, P=0.008);雷帕霉素组和雷帕霉素+狼疮组Cyr61(0.75±0.05), (0.75±0.08)、Beclin-1(0.84±0.08), (0.92± 0.04)、LC3B(0.93±0.16), (0.76±0.08)蛋白表达均无明显改变(P>0.05)。与雷帕霉素组比较, 狼疮组Cyr61(0.99±0.15)蛋白表达量明显升高(P=0.016), Beclin-1(0.64±0.04)和LC3B(0.54±0.05)蛋白表达量明显降低(P=0.013, P=0.001);雷帕霉素+狼疮组Cyr61(0.75±0.08)、Beclin-1(0.92±0.04)、LC3B(0.76±0.08)蛋白表达均无明显改变(P=0.999, P=0.241, P=0.062)。与狼疮组比较, 雷帕霉素+狼疮组Cyr61(0.75±0.08)蛋白表达量明显降低(P=0.016), Beclin-1(0.92±0.04)和LC3B(0.76±0.08)蛋白表达均明显升高(P=0.002, P=0.017)。免疫荧光结果显示:Cyr61和LC3B主要定位于海马神经元胞质中表达, 定量检测结果与蛋白质印迹法检测结果趋势一致, 差异均有统计学意义(P=0.025, P=0.032)。苏木精-伊红染色可见狼疮组小鼠海马区细胞层次和数量减少, 排列稀疏, 细胞核深染, 呈核固缩、偏移等表现;尼氏染色可见尼氏小体相对减少, 神经元排列松散, 部分细胞出现空泡区, 在雷帕霉素治疗后狼疮小鼠上述表现均有所改善。结论雷帕霉素对狼疮小鼠认知功能起保护作用, 其机制可能是通过抑制海马组织Cyr61表达并促进自噬实现的。

• 单位
  右江民族医学院附属医院