天府肉鹅母系不同阶段颗粒细胞内参基因的选择

作者：莫远亮; 王郁石; 王继文^*

来源：浙江大学学报(农业与生命科学版), 2019, 45(03): 376-384.

• 鹅
• 颗粒细胞
• 内参基因
• 稳定性
• 选择

为筛选出鹅卵泡不同阶段颗粒细胞稳定表达的内参基因,以产蛋期天府肉鹅母系卵泡颗粒层细胞为材料,利用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)技术分别对GAPDH、ACTB、TUB、UBC、HMBS、SDH、18S、28S、TBP和HPRT1等10个候选内参基因的相对表达量进行测定,采用ΔCT法、qbase+、NormFinder、BestKeeper等4种评价方法对9个不同阶段卵泡颗粒细胞的表达稳定性进行评定。RT-qPCR熔解曲线和PCR扩增显示,10个候选内参基因的引物特异性良好;通过构建标准曲线,表明各内参基因在系列稀释的浓度梯度内具有良好的线性关系;综合4种方法的评价结果,发现在不同阶段颗粒细胞中,最稳定的3个内参基因依次为SDH、HMBS和18S,稳定性最差的3个内参基因依次为UBC、GAPDH和TUB。在不同阶段颗粒细胞中最稳定的内参基因为SDH和HMBS,以最稳定的2个内参基因的几何平均数作为标准化校正因子可得到更加准确的结果。

• 单位
  四川农业大学; 动物科技学院