瑞芬太尼诱导的SH-SY5Y细胞中PKCε与MOR相互作用的研究

作者：李林芝; 陈彦梅; 罗国娅; 王晓娥; 王文慧; 阿斯汝; 陈元; 崔宇^*

来源：热带医学杂志, 2023, 23(04): 435-591.

DOI：10.3969/j.issn.1672-3619.2023.04.002

• 蛋白激酶Cε
• 瑞芬太尼
• μ阿片受体
• 内化

目的 利用人神经母瘤细胞（SH-SY5Y），探讨瑞芬太尼对蛋白激酶Cε(PKCε)和μ阿片受体（MOR）之间相互作用的影响以及PKCε对瑞芬太尼诱导MOR内化的调节作用。方法 设置对照组和瑞芬太尼处理组（R2 h组），R2 h组采用10μmol/L瑞芬太尼处理SH-SY5Y细胞2 h。采用细胞免疫荧光观察MOR蛋白分布变化，免疫印迹检测MOR蛋白膜浆组分表达变化；细胞免疫荧光检测PKCε与MOR共定位情况，免疫共沉淀检测瑞芬太尼作用不同时间后PKCε与MOR相互作用变化；构建PKCε、MOR及PKCε截短蛋白的原核表达载体并诱导表达和纯化蛋白，采用pull-down实验检测两者直接相互作用情况。分别通过PKCε特异性激动剂和抑制剂预处理，观察激活或抑制PKCε后对瑞芬太尼诱导MOR内化的影响。结果 免疫荧光结果显示，与对照组比较，R2 h组MOR显著内化[（0.72±0.07）vs.(12.57±1.10)]，差异有统计学意义（t=8.90,P<0.000 1）。免疫印迹结果显示，胞膜MOR蛋白显著减少，胞浆组分MOR蛋白增加。细胞免疫荧光共染显示，SH-SY5Y细胞中的PKCε与MOR存在共定位，而免疫共沉淀结果表明瑞芬太尼可增强PKCε和MOR的相互作用。GST pull-down结果显示，PKCε与MOR有直接相互作用，且主要结合区域是PKCε的催化区域。与R2 h组比较，PKCε特异性抑制剂预孵育30 min显著减少瑞芬太尼诱导的MOR内化[（1.00±0.05）vs.(0.76±0.03)]，而激动剂处理则促进MOR的内化[（1.00±0.05）vs.(1.21±0.06)]，差异有统计学意义（F=22.80,P<0.05）。蛋白免疫印迹结果进一步显示，εv1-2抑制MOR膜蛋白的下调（F=31.54,P<0.05）和浆蛋白的增加（F=28.25,P<0.05），而DCPLA则作用相反。结论 PKCε通过与MOR直接相互作用调节瑞芬太尼诱导的SH-SY5Y细胞中的MOR内化，为瑞芬太尼诱导MOR内化机制提供新的科学依据，对寻求防治阿片类药物副作用靶点具有潜在的临床意义。

• 单位
  中山大学; 中山大学附属第一医院