利用CRISPR/Cas9系统构建水通道蛋白9基因敲除小鼠

作者：程全成; 樊婧; 刘怀存; 丁慧如; 方璇; 王建伟; 陈春花^*; 张卫光^*

来源：解剖学报, 2022, 53(01): 126-131.

DOI：10.16098/j.issn.0529-1356.2022.01.018

• 水通道蛋白9
• 规律间隔成簇短回文重复序列/相关蛋白9
• 基因敲除
• 基因型鉴定
• 小鼠

目的利用CRISPR/Cas9系统敲除小鼠水通道蛋白9(AQP-9)基因,构建稳定敲除AQP-9基因的纯合子AQP-9-/-小鼠。方法根据CRISPR/Cas9靶点设计原则,在Ensembl数据库上找到AQP-9基因序列的外显子区域,综合分析选定AQP-9-202的公共外显子2,前期在其两边设计7个小向导RNA(sgRNA)靶点,选择合适靶点,将AQP-9敲除。用PCR以及基因测序手段检测基因敲除效果。获得F1代杂合子小鼠后,继而提供10只野生型小鼠(雌雄各5只)进行繁育,以期得到纯合子AQP-9-/-小鼠。结果前期设计的7个sgRNA靶点基因活性均在95%以上,选择L2和R2作为最终的sgRNA靶点。注射受精卵74枚,移植60枚,得到6只F0代阳性鼠。经过繁育鉴定,最终得到稳定敲除AQP-9基因的纯合子AQP-9-/-小鼠。结论利用CRISPR/Cas9系统获得全身敲除AQP-9基因且可稳定遗传的纯合子AQP-9-/-小鼠。

• 单位
  解剖学教研室; 基础医学院; 北京大学