巨噬细胞移动抑制因子对激素性股骨头缺血性坏死血管修复影响的体外实验研究

作者：马骏; 张晨; 张二洋; 班文瑞; 吕雷锋; 党晓谦; 王坤正

来源：中国修复重建外科杂志, 2016, 30(08): 998-1005.

• 激素性股骨头缺血性坏死
• 巨噬细胞移动抑制因子
• 血管修复
• 体外实验

目的通过检测体外缺氧/激素作用下内皮细胞(endothelial cells,ECs)增殖、迁徙以及巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)和VEGF的表达变化,探讨激素性股骨头缺血性坏死(steroid-induced avascular necrosis of femoral head,SANFH)血管修复障碍发生机制。方法取第3代人脐静脉ECs(human umbilical vein ECs,HUVECs)进行分组干预。正常对照组(A组)细胞不作任何干预;地塞米松组(B组):用含1.0×10~(-6) mol/L地塞米松的完全培养液干预;缺氧培养组(C组):细胞在低氧细胞培养罐内培养;地塞米松+缺氧培养组(D组):细胞在低氧细胞培养罐内培养,同时用含1.0×10~(-6) mol/L地塞米松的完全培养液干预。干预培养后24 h,行Alamar Blue细胞活性检测及活/死细胞染色观测细胞增殖情况,细胞骨架染色观察细胞骨架形态;采用划痕实验比较各组细胞迁徙能力,ELISA法检测各组细胞MIF及VEGF表达水平。结果干预培养后24 h,Alamar Blue细胞活性检测及活/死细胞染色示C组细胞活性最好且活细胞数多,D组细胞活性最差、活细胞数最少,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。细胞骨架染色见,A、B组细胞形态正常;C组细胞大量增殖,细胞内见大量分泌颗粒;D组细胞骨架形态异常。划痕实验示C组细胞迁移能力最强,D组最弱。各组MIF和VEGF累积浓度随时间延长均显著增高。各时间点,C组MIF累积浓度显著高于其他各组(P<0.05)。干预培养24 h内,各组组内1~8 h时MIF阶段浓度显著低于0~1 h及8~24 h时(P<0.05);且C组0~1 h和8~24 h时MIF阶段浓度显著高于其他组(P<0.05)。干预培养2 h内,各组组内0.5~1 h MIF阶段浓度显著高于其他各时间段(P<0.05)。8、24 h时C组VEGF累积浓度显著高于其他各组(P<0.05)。干预24 h内,C、D组8~24 h时VEGF阶段浓度显著高于其他各时间段(P<0.05);干预培养2 h内,各组组内各时间段及组间VEGF阶段浓度比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论缺氧条件下ECs增殖及迁徙能力增强,MIF及VEGF分泌增加;而高浓度地塞米松会抑制上述过程,引发血管修复障碍,导致SANFH发生、发展。

• 单位
  西安交通大学第二附属医院