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摘要
目的:探究人脐带间充质干细胞来源的外泌体(MSC-exosomes)对盆腔器官脱垂(POP)患者阴道壁成纤维细胞的调节作用。方法:采用超速离心法提取MSC-exosomes,应用透射电镜观察外泌体形态，Western blot法检测特异分子HSP90、CD63和TSG101表达，对外泌体进行综合鉴定。采用组织爬块和胶原酶消化法从POP患者阴道壁组织中分离培养成纤维细胞。采用PKH-67绿色荧光染料标记外泌体，添加PKH-67标记的MSC-exosomes,观察成纤维细胞对外泌体的摄取情况。分别将终浓度为50μg/mL、100μg/mL的MSC-exosomes加入成纤维细胞中，对照组加等体积PBS。MTS法检测3组细胞在12、24、36、48、60h和72h的增殖情况。收集成纤维细胞蛋白，Western blot法检测成纤维细胞胞外基质代谢相关基因Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、LOXL-2、Fibronectin和MMP-2等表达，并进行相对定量统计分析。结果:分离到的外泌体特异表达标志蛋白HSP90和CD63,不表达内质网蛋白TSG101,透射电镜观察到具有双层脂膜结构的圆形囊泡小体，表明分离得到了外泌体。从脱垂患者阴道壁组织中成功培养得到成纤维细胞，其形态呈长梭型或纺锤形，细胞排列成簇状。PKH-67标记的MSC-exosomes添加24h后，细胞内可见丰富的绿色荧光信号，表明MSC-exosomes可被阴道壁成纤维细胞有效大量摄取。50、100μg/mL MSC-exosomes均可促进阴道壁成纤维细胞的增殖。50、100μg/mL exosome作用24h后，Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、LOXL-2、Fibronectin表达增加，其中Fibronectin表达升高最显著，100μg/mL exosome组较50μg/mL exosomes组促进作用更明显，Collagen I在48h时较24h升高作用更明显，而MMP-2在MSC-exosomes添加后均出现蛋白表达下降，表明细胞外基质分解降低。结论:MSC-exosomes可有效促进POP阴道壁成纤维细胞的增殖，并促进成纤维细胞胞外基质的合成，减少细胞外基质的降解。
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单位首都医科大学附属北京妇产医院
