狂犬病病毒固定株PV2061在人二倍体细胞MRC-5上适应株的建立

作者：廖辉; 吴琼; 焦龙; 甄祖刚; 杨文腰; 周荔葆^*

来源：中国生物制品学杂志, 2022, 35(07): 785-789.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.003651

• 狂犬病病毒
• 固定株
• 二倍体细胞
• 连续传代
• 病毒滴度
• 感染方式
• 层析纯化

目的 建立狂犬病病毒固定株PV2061在人二倍体细胞MRC-5上的适应株，为狂犬病疫苗研究提供生产用毒株。方法 将狂犬病病毒固定株PV2061接种于MRC-5细胞并进行连续性传代，通过对感染剂量（1∶100、1∶200、1∶300、1∶400、1∶500）、收获天数（4、7、10、13、16 d）及感染方式（混种感染、吸附感染、带毒传代）的优化，确定在MRC-5细胞上的培养条件，并分析不同层析介质（Sepharose 4FF、Sepharose 6FF）对狂犬病病毒分离纯化效果的影响。结果 狂犬病病毒固定株PV2061能较好地适应MRC-5细胞，通过连续性传代，在第4代病毒滴度可达6.0 lgLD50/mL以上，11～19代病毒滴度稳定在6.5 lgLD50/mL。感染剂量在1∶100～1∶500范围内，病毒滴度均能达6.0 lgLD50/mL以上；病毒峰值主要集中在8～13 d；混种感染和带毒传代优于吸附感染，病毒滴度均在5.5 lgLD50/mL以上。与Sepharose 6FF相比，Sepharose 4FF能有效去除总蛋白质，两种介质对抗原回收率均在85%～120%范围内，牛血清白蛋白残留量均低于50 ng/mL。结论 建立了MRC-5细胞传代适应的狂犬病病毒适应株MPV2061，为后续人用狂犬病疫苗生产工艺的研究提供了数据支持。