构建具有靶向治疗作用的工程化生长转化因子-β3蛋白的实验研究

作者：李进; 杨述华; 郑东; 杨操; 冯勇; 傅德皓; 梅荣成; 徐亮

来源：中华创伤骨科杂志, 2007, 9(9): 842-846.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1671-7600.2007.09.014

• 工程化蛋白
• 靶向治疗
• 生长转化因子-β3
• 真核细胞
• 软骨分化

目的 构建前体相关蛋白(LAP)为潜伏作用,基质蛋白金属酶(MMP)酶切位点为导向作用,生长转化因子-β3(TGF-β3)活性部分为治疗作用的具有靶向治疗作用的工程化TGF-β3蛋白,并检验其特异性的靶向治疗作用.方法 将人工合成的编码MMP酶切位点氨基酸的正、反义DNA序列经基因重组定向克隆插入真核表达载体pIRES-EGFP中,获得pIRES-EGFP-MMP重组体,用PCR从大鼠胚胎组织中TGF-β3的LAP段和TGF-β3的活性部分mTGF-β3,分别插入pIRES-EGFP-MMP中MMP的上游和下游,获得pIRES-EGFP-LAP-MMP-mTGF-β3重组体.然后将其转染入CHO细胞,最后用Westen Blot检测不同环境下细胞上清液中TGF-β3蛋白的表达.结果 经过测序和酶切鉴定,确认成功构建了pIRES-EGFP-LAP-MMP-mTGF-β3质粒,转染CHO细胞后也成功表达了工程化TGF-β3蛋白,而且这种蛋白只在有MMP存在的条件下才能特异性地释放出有活性的mTGF-β3.结论 通过基因工程技术,可成功构建工程化TGF-β3蛋白真核表达载体,其蛋白产物具有特异性的靶向治疗功能.

• 单位
  华中科技大学同济医学院附属协和医院