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摘要
目的 构建E1区缺失的复制缺陷型 5型重组腺病毒载体 ,探讨p16INK4a基因对肺癌细胞株A5 4 9细胞增殖与衰老的影响。方法 通过脂质体介导 ,将pAdCMV p16INK4a与pJM17共转染人 5型腺病毒E1基因转化的人胚肾细胞系 2 93细胞 ,同源重组产生腺病毒空斑 ,用双重PCR筛选出携带p16INK4a基因的重组腺病毒并感染肺癌细胞A5 4 9,用免疫组化及Westernblot检测腺病毒载体介导的基因转移效率和蛋白表达水平 ,分别用X gal染色和TRAP ELISA检测A5 4 9细胞中衰老相关 β 半乳糖苷酶及端粒酶活性。结果 腺病毒载体可将 95 %以上的p16INK4a基因转移到A5 4 9中 ,受感染细胞有外源p16INK4a蛋白表达 ,其生长受到明显抑制 ,即p16INK4a基因能诱导A5 4 9细胞表达衰老相关 β 半乳糖苷酶 ,并抑制细胞中的端粒酶活性。结论 复制缺陷型重组腺病毒 ,能有效地介导外源基因的转移与表达 ,可用于基因免疫和基因治疗 ;p16INK4a基因能抑制肺癌细胞A5 4 9生长并诱导其发生复制性衰老。
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单位军事医学科学院; 解放军总医院
