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摘要
脂肪酸脱氢酶2(FAD2)是调控油菜种子油酸含量的关键酶。为建立其灵敏、便捷的免疫学检测方法,本研究合成了BnFAD2(UniProtKB:C3W518)中2个多肽片段,与KLH载体蛋白偶联,混合免疫新西兰大白兔,分离纯化得到了油菜BnFAD2兔源多克隆抗体。应用于FAD2-RNAi高油酸转基因油菜品系W-4不同世代果荚及成熟叶片总蛋白质的免疫印迹检测,结果表明,该兔源多克隆抗体,可在油菜内质网成分中识别FAD2,特征性条带大小为95 000。在果荚总蛋白质样本中,WT的FAD2含量高于转基因材料W-4,而在叶片总蛋白质样本中WT和W-4的FAD2含量相同。本研究成功制备出BnFAD2兔源多克隆抗体,并首次验证出油菜内源性FAD2以多聚体形式行使功能,为BnFAD2快速检测以及进一步研究BnFAD2对油脂稳定性影响提供研究工具。
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