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摘要
本试验旨在获得临床上逐渐增多的猪圆环病毒2d基因型毒株(PCV2d),并对其引入生物素标记。首先从陕西咸阳某临床发病猪场采集了2头发病仔猪和15头未发病仔猪的组织样本，对其进行猪圆环病毒2型(PCV2)检测，并对阳性样本进行测序及序列比对，将获得的PCV2d基因型毒株基因组orf2中226～246 bp序列替换为生物素受体肽(BAP)编码序列并克隆入质粒载体，同时稳定构建表达原核生物素连接酶(BirA)的PK15细胞系，将替换有BAP的PCV2d基因组酶切并环化后转染稳定表达BirA的PK15细胞，连续盲传5代后鉴定获得的重组病毒。结果显示，检测的组织样本中共有5头仔猪的样本为PCV2阳性，其中1份样本为PCV2d基因型，4份样本为PCV2b基因型；在获得BAP序列替换的PCV2d,构建重组质粒T-PCV2d-BAP和稳定表达BirA的PK15细胞系后，将环化的PCV2d-BAP转染稳定表达BirA的PK15细胞并盲传5代，经PCR和Western blot检测均为PCV2阳性，且能被链酶亲和素识别。本试验成功获得的生物素标记重组PCV2d基因型毒株为后续探究PCV2d基因型毒株免疫逃避机制提供一个非常有效的工具。
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