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摘要
目的观察压力性损伤形成过程中受压肌肉组织细胞凋亡及相关蛋白表达的变化,探讨其在压力性损伤中的作用机制。方法按随机数字表法将40只雄性SD大鼠分为正常对照组及3、5、7、9个受压周期组,每组8只。采用缺血/再灌注(I/R)磁力循环压迫法在大鼠后肢股薄肌处构建压力性损伤模型,以施压12 h、放松12 h为1个受压周期,其中5、7、9个受压周期组在受压3个周期后用无菌刀片划破受压皮肤;正常对照组不进行任何处理。于实验终点,取受压中心(正常对照组取相同部位)肌肉组织标本后处死大鼠,用苏木素-伊红(HE)染色观察组织形态改变;用Hoechst 33258染色观察组织细胞凋亡情况;用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测热休克蛋白70(HSP70)、B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达。结果①HE染色显示:受压肌肉组织出现不同程度的病理退化现象,随受压周期的增加,组织形态改变逐渐加重。②Hoechst 33258染色显示:受压肌肉组织细胞核呈颗粒状荧光和致密浓染的固缩形态,随受压周期的增加,细胞凋亡数逐渐增加。③Western Blot检测显示:随受压周期的增加,HSP70和Bax蛋白表达逐渐升高,Bcl-2蛋白表达逐渐下降。与正常对照组比较,9个受压周期组HSP70蛋白表达升高差异有统计学意义(HSP70/GAPDH:1.78±0.21比0.55±0.17,P<0.01),7个受压周期组和9个受压周期组Bax蛋白表达升高差异有统计学意义(Bax/GAPDH:0.96±0.09、0.98±0.02比0.67±0.07,均P<0.01),3、5、7、9个受压周期组Bcl-2蛋白表达均明显下降(Bcl-2/GAPDH:0.17±0.03、0.13±0.03、0.14±0.03、0.10±0.02比0.36±0.04,均P<0.05)。结论 I/R应激下压力性损伤肌肉组织可发生细胞凋亡,HSP70及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax介导的细胞凋亡可能参与了压力性损伤的形成。
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单位青岛市市立医院; 青岛大学
