EB病毒潜伏膜蛋白2A诱导细胞毒性T细胞抗鼻咽癌的体内外实验

作者：徐洁洁; 姚堃; 俞晨杰; 陈曦; 陆美萍; 丁传林; 孙华; 李百周

来源：中华耳鼻咽喉头颈外科杂志, 2006, 41(01): 54-59.

DOI：10.3760/j.issn:1673-0860.2006.01.015

• 鼻咽肿瘤
• 疱疹病毒4型,人
• 膜蛋白
• 树突细胞
• T淋巴细胞

目的观察EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)-潜伏膜蛋白2A(latent membrane protein2A,LMP2A)转染人树突状细胞(dendritic cell,DC)诱导特异性细胞毒性T细胞(cytotoxicity Tlymphocyte,CTL)的体外生物学特性;建立表达EBV-LMP2A的裸鼠鼻咽癌动物模型,探讨LMP2A特异性CTL在荷瘤鼠体内的抗肿瘤效应。方法分离人外周血单核细胞(pripheral blood mononuclearcell,PBMC),以粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-monocyte colony stimulating factor,GM-CSF)、白细胞介素4(interleukin-4,IL-4)及肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导培养获得DC,荧光激活细胞分选仪(fluorescence activated cell sorter,FACS)检测成熟DC的表面分子表达。用LMP2A重组腺病毒转染成熟DC,将转染DC与自体PBMC混合培养,在白细胞介素2(interleukin-2,IL-2)作用下诱导针对LMP2A的特异性CTL,FACS检测CTL群体中阳性细胞的组成。将鼻咽癌CNE细胞接种BALB/c裸鼠,建立鼻咽癌动物模型;在裸鼠肿瘤局部注射LMP2A特异性CTL,观察治疗后移植瘤生长情况及病理变化。结果人外周血PBMC体外在GM-CSF、IL-4、TNF-α诱导下获得典型形态及表型特征的成熟DC。FACS检测表明,以LMP2A重组腺病毒转染DC诱导的CTL细胞群体以CD4、CD8阳性细胞组成为主。在接种CNE细胞3周后建立表达EBV-LMP2A的裸鼠鼻咽癌动物模型;动物体内实验表明注射CTL的裸鼠肿瘤生长缓慢,体积明显小于对照组(P<0.01);病理检查显示肿瘤局部发生液化性坏死并有淋巴细胞浸润。结论人外周血单核细胞体外经细胞因子诱导,可生成具典型特征的成熟DC。利用LMP2A重组腺病毒将LMP2A基因转入DC,可在同一个体体外诱导出针对LMP2A的特异性CTL。CNE细胞接种裸鼠,可成功构建鼻咽癌动物模型;LMP2A特异性CTL在动物体内可明显抑制鼻咽癌肿瘤的生长,发挥有效的抗肿瘤作用。

• 单位
  南京医科大学; 南京大学医学院附属鼓楼医院; 南京医科大学第一附属医院