基于16S rRNA测序的肠道菌群探讨化浊解毒活血通络方对脑缺血再灌注损伤大鼠脑-肠轴的影响

作者：霍瑞卿; 赵敏菡; 李芳钊; 韩宇帆; 孙阔; 田军彪^*

来源：中国实验方剂学杂志, 2022, 28(01): 121-130.

DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20220194

• 化浊解毒活血通络方
• 脑缺血再灌注损伤
• 肠道菌群
• 16S rRNA
• 肠道屏障

目的:研究化浊解毒活血通络方对脑缺血再灌注损伤大鼠肠道菌群的影响,探讨中药调控肠道微生物群进而恢复脑-肠轴平衡的机制。方法:将50只SPF级雄性SD大鼠随机分为假手术组,模型组,化浊解毒活血通络方高(25.0 g·kg-1),中(12.5 g·kg-1),低(6.25 g·kg-1)剂量组,每组10只。参照Longa法并结合既往研究经验制备大脑中动脉梗塞大鼠模型,缺血2 h后再灌注。于脑缺血再灌注损伤72 h检测大鼠神经功能缺损情况、脑梗死范围百分比;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测大鼠结肠闭锁小带蛋白-1(ZO-1),闭锁蛋白(Occludin)mRNA表达;苏木素-伊红(HE)染色观察各组大鼠肠道组织、脑组织损坏程度;每组收集6只大鼠粪便进行16S rRNA测序;免疫组化、酶联免疫吸附测定试验(ELISA)检测肠道组织、外周血、脑组织调节性T细胞(Treg),辅助性T细胞17(Th17)的表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠神经功能缺损症状加重(P<0.05),脑梗死面积增加(P<0.05);与模型组比较,化浊解毒活血通络方高、中剂量组大鼠神经功能缺损症状明显减轻(P<0.05),脑梗死面积减少(P<0.05)。与假手术组比较,模型组大鼠结肠黏膜结构破坏,上皮细胞、杯状细胞结构不完整;与模型比较,化浊解毒活血通络方高、中剂量组大鼠结肠黏膜破坏较少,上皮细胞、杯状细胞结构完整。与假手术组比较,模型组大鼠Occludin,ZO-1 mRNA表达降低(P<0.05),与模型组比较,化浊解毒活血通络方高剂量组Occludin,ZO-1 mRNA水平均有所增加(P<0.05)。模型组与假手术组肠道菌群微生态结构存在差异,化浊解毒活血通络方高剂量组与假手术组组群落结果更相近。与假手术组比较,模型组大鼠肠道组织、外周血、脑组织Treg细胞表达下降,Th17细胞表达升高(P<0.05);与模型比较,化浊解毒活血通络方高、中剂量组大鼠肠道组织、外周血、脑组织Treg细胞表达升高,Th17细胞表达下降(P<0.05)。结论:化浊解毒活血通络方可能通过调整肠道微生物的丰度和多样性,改善肠壁通透性,减少肠道Th17细胞迁移至缺血侧脑组织,减少炎症反应,进而减轻大鼠脑缺血再灌注损伤。

• 单位
  河北省中医院; 河北中医学院