奶山羊BLG基因敲除载体的构建

作者：陈华涛; 李倩; 胡林勇; 王爱华; 靳亚平; 刘军; 杨艳

来源：中国兽医学报, 2011, 31(06): 858-863.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2011.06.016

• 奶山羊
• BLG基因
• 基因敲除
• 打靶载体

根据已知的BLG序列设计引物,通过PCR技术克隆同源臂序列,5′端同源臂2 264bp,包括外显子1,3′端同源臂4 461bp,包括全部的外显子3、4、5、6、7,分别连入克隆载体pMD18-T Simple载体中并测序。然后以含有正负筛选标记基因的ploxpⅡ载体为基础,将5′端和3′端同源臂片段先后连入其中,进行酶切、PCR鉴定。将构建好的基因敲除载体转化组成型表达Cre重组酶的大肠杆菌BM25.8,验证Loxp位点的活性。结果表明,构建了奶山羊BLG基因第2外显子缺失的基因敲除载体pBLG2T,且pBLG2T载体中的正选neo基因可以被Cre重组酶去除。为获得BLG 1条等位基因缺失型细胞株以及培育高产优质奶山羊新品种奠定基础。

• 单位
  农业部; 西北农林科技大学