兔抗人免疫相关鸟苷三磷酸酶基因多克隆抗体的制备与鉴定

作者：赵桂宪; 吴志英; 陈万金; 林毅; 王柠

来源：中国临床神经科学, 2009, 17(06): 601-605.

DOI：10.3969/j.issn.1008-0678.2009.06.008

• 免疫相关鸟苷三磷酸酶基因
• 融合蛋白
• 多克隆抗体

目的:表达人免疫相关鸟苷三磷酸酶基因(IRGM)a全长融合蛋白,制备高质量的兔抗人IRGM多克隆抗体。方法:将IRGMa全长cDNA片段分别克隆到原核表达载体pGEX-4T-2和真核表达载体pCMV-myc,测序验证序列正确。在大肠埃希菌Ecoli BL21中表达IRGMa/GST融合蛋白,用纯化的可溶性IRGMa/GST融合蛋白免疫新西兰大白兔,制备兔抗人IRGM抗体,采用ELISA、免疫印迹和竞争抑制等多种方法验证其敏感度和特异度。结果:自制的兔抗人IRGM多克隆抗体的特异度和敏感度均较高,效价更高于市售抗体。结论:成功制备了兔抗人IRGM多克隆抗体,为进一步的功能研究打下基础。

• 单位
  神经内科; 福建医科大学附属第一医院; 复旦大学附属华山医院