毕赤酵母表达解淀粉芽孢杆菌壳聚糖酶及其水解制备可控结构壳寡糖

作者：程功; 焦思明; 冯翠; 贾培媛; 任立世; 杜昱光^*

来源：食品科学, 2019, 40(08): 73-78.

• 毕赤酵母
• 解淀粉芽孢杆菌
• 壳聚糖酶
• 壳寡糖
• 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱
• 核磁共振

优化并全合成解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)壳聚糖酶编码基因并在毕赤酵母(Pichia pastoris)中实现分泌表达,表达产物的蛋白质量浓度达到0.23 mg/mL。壳聚糖水解酶的最适pH值为5.0,最适温度为45℃,比活力达52.2 U/mL。该酶在50℃以下较稳定。利用该酶水解低脱乙酰度壳聚糖并对产物进行了组成及结构分析。基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱分析结果显示,酶解产物中包含聚合度3～15、不同脱乙酰度的壳寡糖。核磁共振鉴定结果显示,壳寡糖组分的还原末端及非还原末端均主要由氨基葡萄糖组成。综上,本研究高效表达了来源于解淀粉芽孢杆菌的壳聚糖酶,并制备了确定末端结构的壳寡糖,为壳寡糖的结构与功能关系研究提供理论支持。

• 单位
  中国科学院过程工程研究所; 生化工程国家重点实验室