龙眼miR408与DlLAC12克隆及其在球形胚发生和非生物胁迫下的表达分析

作者：徐小萍; 曹清影; 蔡柔荻; 官庆栩; 张梓浩; 陈裕坤; 徐涵; 林玉玲; 赖钟雄^*

来源：园艺学报, 2022, 49(09): 1866-1882.

DOI：10.16420/j.issn.0513-353x.2021-0573

• 龙眼
• 体胚发生
• miR408
• DlLAC12
• 非生物胁迫

为探讨mi R408及靶基因DlLAC12在龙眼球形体细胞胚诱导及不同非生物胁迫下的表达模式，采用miR-RACE PCR和Tail-PCR克隆获得pri-miR408 cDNA和转录起始位点、dlo-miR408 gDNA、靶基因DlLAC12 cDNA及启动子pro-MIR408序列。研究结果显示：dlo-pri-miR408 cDNA、gDNA全长均为706 bp,5′端转录起始位点为胞嘧啶（C）。DlLAC12 cDNA全长为1 725 bp,pro-MIR408全长为1 532bp。pro-MIR408序列上存在ABA、GA3、JA等激素信号传导顺式作用元件和响应光、低温胁迫等相关元件。q RT-PCR结果显示，dlo-miR408-3p随外源添加的蔗糖浓度、Cu2+浓度及培养温度的变化呈现动态表达；而dlo-miR408-5p1对蔗糖不敏感，在铜离子失衡和低温时下调表达。dlo-miR408-3p与DlLAC12负调控模式能响应高浓度ABA（≥500μmol·L-1）处理，而不同浓度GA3处理下二者表达模式一致。dlo-miR408-3p与DlLAC12在球形胚诱导不同天数呈现负调控，说明在球形胚诱导过程发挥作用。试验表明，dlo-miR408与靶基因Dl LAC12可参与龙眼体胚发生与非生物胁迫响应。

• 单位
  福建农林大学