6种不同实时荧光定量PCR仪对新型冠状病毒核酸检测性能的影响探讨

作者：陈家颖; 耿帜; 佘丹; 陈凤花^*

来源：临床血液学杂志, 2023, 36(10): 697-706.

DOI：10.13201/j.issn.1004-2806.2023.10.002

• 新型冠状病毒
• 实时荧光定量PCR仪
• 检测性能
• 检出限
• 精密度

目的:探讨6种不同型号的实时荧光定量PCR仪(分别为CFX96 DeepWell、GENTIER 96E、Cobas z480、LightCycler 480Ⅱ、ABI 7500、QuantStudio 5,依次标为A、B、C、D、E、F)对新型冠状病毒(2019-nCoV)核酸检测性能的影响，以便选择分析性能佳的检测系统用于临床检测。方法:应用2019-nCoV阴性混合鼻咽拭子样本将商品化2019-nCoV RNA液体室内质控品(假病毒)先10倍稀释接着2.5倍梯度稀释至1∶10、1∶25、1∶62.5、1∶156.25、1∶390.63、1∶976.56、1∶2 441.41和1∶6 103.52八个不同浓度，连续3 d内每天每个浓度做5个复孔，共计15个复孔，磁珠法提取核酸后应用同一种2019-nCoV扩增试剂在6种不同实时荧光定量PCR仪上进行扩增以评价其检出限；将1∶10和1∶25两个稀释度的质控品样本，连续5 d内每天每个浓度做5个复孔，共计25孔，磁珠法提取核酸后应用同一种2019-nCoV扩增试剂在6种不同实时荧光定量PCR仪上进行扩增以评价靶基因循环阈值(Ct)的重复性和实验室内精密度。结果:(1)6种实时荧光定量PCR仪对1∶10、1∶25和1∶62.5三个稀释度的质控品样本中ORF1ab和N基因的检出率均为100.0%;而对1∶156.25稀释样本中ORF1ab和N基因的检出率：仪器A为100.0%和100.0%,B为66.7%和86.7%,C为100.0%和100.0%,D为93.3%和93.3%,E为93.3%和93.3%,F为100.0%和100.0%;对1∶390.63稀释样本中ORF1ab和N基因的检出率：仪器A为60.0%和86.7%,B为60.0%和80.0%,C为66.7%和73.3%,D为73.3%和93.3%,E为66.7%和53.3%,F为73.3%和93.3%;1∶976.56、1∶2 441.41和1∶6 103.52三个稀释度的质控品样本中靶基因的检出率分别为4.00%～60.00%、6.67%～20.00%和0～20.00%。(2)6种不同实时荧光定量PCR仪对1∶10和1∶25两个稀释度的质控品样本中Ct的重复性和实验室内不精密度均<5.00%。结论:不同的实时荧光定量PCR仪对2019-nCoV核酸检测性能存在影响，该2019-nCoV扩增试剂在仪器C、F上的分析灵敏度优于另外4种实时荧光定量PCR仪。

• 单位
  华中科技大学同济医学院附属协和医院