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摘要
目的目前认为内质网是心血管疾病治疗的新靶点,其应激反应在高血压心血管重塑中具有重要作用。文中通过建立衣霉素及二硫苏糖醇诱导人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)凋亡模型,探讨17-β雌二醇对衣霉素/二硫苏糖醇诱导HUVECs ERS凋亡的影响。方法实验前期已确定10μmol/L衣霉素处理细胞10 h或2 mmol/L二硫苏糖醇处理细胞8 h为诱导细胞ERS凋亡最佳浓度和时间。浓度为10-8mol/L的17-β雌二醇对ERS的保护作用最明显。根据是否用衣霉素/二硫苏糖醇,17-β雌二醇,雌激素受体拮抗剂(ICI182,780和G15)处理进行如下分组:1空白对照A、B组;2衣霉素/二硫苏糖醇组;3衣霉素/二硫苏糖醇+17-β雌二醇组;4衣霉素/二硫苏糖醇+17-β雌二醇+ICI组;5衣霉素/二硫苏糖醇+17-β雌二醇+G15组;6衣霉素/二硫苏糖醇+17-β雌二醇+ICI+G15组。Western blot检测ERS诱导凋亡的标志分子GRP78、剪切的caspase 12及CHOP的表达,及Hochest染色检测凋亡细胞数的变化。结果与空白对照A、B组比较,衣霉素/二硫苏糖醇组GRP78、caspase-12和CHOP的表达升高(P<0.05);与衣霉素组比较,衣霉素+17-β雌二醇组GRP78、caspase-12和CHOP的表达均下降(6.80±1.07 vs4.01±0.46,1.54±0.32 vs 0.88±0.10,1.91±0.37 vs 0.91±0.02,P<0.05);与衣霉素+17-β雌二醇组比较,衣霉素+17-β雌二醇+ICI组CHOP表达升高(0.91±0.02 vs 0.96±0.02,P<0.05),衣霉素+17-β雌二醇+G15组GRP78、caspase-12表达升高(4.01±0.46 vs 5.25±0.80,0.88±0.10 vs 1.02±0.07,P<0.05),衣霉素+17-β雌二醇+ICI+G15组GRP78、caspase-12和CHOP的表达升高(P<0.05)。与二硫苏糖醇组比较,二硫苏糖醇+17-β雌二醇组GRP78和CHOP表达均下降(1.81±0.08 vs 1.30±0.14,1.00±0.13 vs 0.51±0.01,P<0.05);与二硫苏糖醇+17-β雌二醇组比较,二硫苏糖醇+17-β雌二醇+ICI组GRP78和CHOP的表达下降(P<0.05),二硫苏糖醇+17-β雌二醇+G15组GRP78表达升高(P<0.05),二硫苏糖醇+17-β雌二醇+ICI+G15组GRP78、caspase-12和CHOP的表达升高(P<0.05)。Hochest染色检测细胞凋亡数目的变化与Western blot的结果一致。结论 17-β雌二醇可抑制衣霉素/二硫苏糖醇诱导的人脐静脉内皮细胞ERS引起的凋亡,雌激素通过调节雌激素受体保持ERS的稳态,进而保护心血管。
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