小鼠miR-122重组慢病毒载体的构建和鉴定

作者：邱荣林; 邓小耿; 谢平; 李治熹; 唐晶

来源：岭南现代临床外科, 2012, 12(02): 92-95+102.

• MicroRNA-122
• 载体构建
• 慢病毒

目的构建携带miR-122的重组慢病毒表达载体,为研究miR-122的功能和作用机制奠定基础。方法从小鼠基因组DNA采用PCR法扩增出pre-miR-122基因,测序后克隆至pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP逆转录病毒载体上,测序鉴定,病毒包装后,转染NIH3T3细胞,并通过绿色荧光蛋白进行病毒滴度测定。将重组慢病毒感染肝前体细胞(HPCs),利用实时定量PCR检测miR-122的表达。结果重组慢病毒载体pCDH-CMV-miR-122-EF1-copGFP经PCR扩增及测序鉴定正确,并得到了滴度为(1～5)×106IU/mL的病毒液。pCDH-CMV-miR-122-EF1-copGFP感染的肝前体细胞中miR-122表达显著增强。结论成功构建了小鼠miR-122重组慢病毒,并在肝前体细胞中高效表达出miR-122,为进行miR-122的功能和机理奠定了良好的基础。

• 单位
  中山大学孙逸仙纪念医院