血管内皮生长因子原核表达载体的构建及表达

作者：庞丽君; 刘道洁; 林明华; 刘凯; 刘晓霓; 陈德喜^*

来源：中国医药导报, 2020, 17(23): 4-197.

• 血管内皮生长因子
• 肝细胞癌
• 基因克隆
• 原核表达

目的构建血管内皮生长因子(VEGF)原核表达载体并诱导其表达蛋白,为后续进行VEGF相关研究奠定基础。方法通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增得到目的片段,将DNA片段克隆至带组氨酸标签的p ET-30a(+)载体上;构建的重组质粒经过菌液聚合酶链式反应(PCR)及测序方法鉴定;利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组质粒表达,通过蛋白质印迹法(Western blot)进行鉴定。结果以HepG2细胞为模板扩增出大小正确的片段;构建的p ET-30a-VEGF重组质粒经菌液PCR及DNA测序证实序列正确;考马斯亮蓝染胶和Western blot结果显示IPTG诱导表达的融合蛋白分子量正确且条带单一。结论成功构建p ET-30a-VEGF原核表达质粒,后续可进行大量诱导表达用于肝癌的诊疗相关研究。

• 单位
  北京市肝病研究所; 首都医科大学附属北京佑安医院; 北京市海淀区妇幼保健院