EST3-EGFP融合蛋白重组体的构建和表达

作者：华静; 石文芳; 李卓娅

来源：华中医学杂志, 2006, (05): 435-436.

• 序列表达标签
• 增强型绿色荧光蛋白
• 跨膜肿瘤坏死因子-α

目的构建EST3-EGFP融合蛋白穿梭载体并检测其表达。方法重叠延伸PCR获取EST3-EGFP融合基因,克隆至pTriEx-4穿梭载体中,重组体转化至细菌Rosetta(De3)pLacI,诱导蛋白的表达,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定表达的融合蛋白;免疫印迹法检测重组蛋白的免疫学活性;荧光显微镜观察转化宿主细菌的发光活性。结果成功构建了EST3-EGFP重组体;融合蛋白主要分布于表达菌细胞质中;免疫印迹杂交检测表明重组蛋白具有EST3的免疫原性;诱导后的菌体在荧光显微镜下可见强烈的绿色荧光。结论成功构建的EST3-EGFP穿梭表达载体具有EST3免疫原性和GFP发光特性。

• 单位
  华中科技大学同济医学院