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摘要
目的探讨σ1受体(σ1R)在子宫颈癌组织中高表达的意义及其配体化合物对子宫颈癌细胞生长的作用。方法 (1)收集2007年1月至2012年12月郑州大学第二附属医院病理科存档的经手术切除或活检的不同程度子宫颈病变组织蜡块160份, 其中子宫颈癌组织88份、高级别鳞状上皮内病变(HSIL)组织42份、正常子宫颈组织30份(因子宫肌瘤、单纯良性卵巢囊肿行子宫全切除术);另选择HPV18型阳性的子宫颈腺癌细胞系HeLa细胞和HPV16型阳性的子宫颈鳞癌细胞系SiHa细胞。采用免疫组化SP法检测上述组织和细胞中σ1R蛋白的表达, 并分析σ1R蛋白表达与子宫颈癌患者不同临床病理特征及预后的相关性。(2)从癌症基因组图谱(TCGA)数据库中筛选出临床资料和σ1R基因数据均完整的子宫颈癌患者249例, 分析σ1R表达与子宫颈癌患者不同临床病理特征的相关性。(3)合成σ1R配体化合物(共4个, 分别为化合物14a、14e、15c、15f)并作用于HeLa、SiHa细胞, 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖情况及细胞对奈达铂的敏感性, 细胞划痕实验检测细胞迁移能力, 流式细胞仪检测细胞周期比例和凋亡率。结果 (1)免疫组化SP法检测显示, 正常子宫颈组织中σ1R蛋白少量表达于胞质, HSIL组织中σ1R蛋白中等量表达于胞质及个别胞核, 子宫颈癌组织中σ1R蛋白大量表达于胞质和胞核;子宫颈癌HeLa和SiHa细胞中σ1R蛋白大量表达于胞质和胞核。子宫颈癌患者σ1R蛋白的阳性表达率与病理类型明显相关(P=0.020), 而与患者年龄、临床分期、病理分化程度均无明显相关性(P>0.05)。子宫颈腺癌患者σ1R蛋白的胞核表达阳性率(10/18)明显高于子宫颈鳞癌(27.1%, 19/70;P=0.024)。70例子宫颈鳞癌患者中, 47例σ1R蛋白阳性患者的中位生存时间[(45.8±3.1)个月]明显低于23例σ1R蛋白阴性表达患者[(51.7±2.9)个月;t=4.037, P=0.045];该47例患者中, 15例为胞质表达伴胞核表达, 32例仅胞质表达, 中位生存时间前者明显短于后者[分别为(38.9±3.8)、(48.7±2.1)个月;t=5.239, P=0.022]。18例子宫颈腺癌患者中, 10例为胞质表达伴胞核表达, 8例仅胞质表达, 中位生存时间前者也明显短于后者[分别为(35.0±6.3)、(44.2±4.2)个月;t=4.505, P=0.034]。(2)对TCGA数据库中筛选出的249例σ1R mRNA表达相关的子宫颈癌患者资料的分析显示, 208例鳞癌患者中, σ1R mRNA表达与患者年龄明显相关(P=0.005);41例腺癌患者中, σ1R mRNA表达与临床分期、淋巴结转移、脉管浸润明显相关(P<0.05)。208例鳞癌患者中, σ1R mRNA表达与患者中位生存时间无明显相关性(P=0.930);而41例腺癌患者中, σ1R mRNA表达与中位生存时间明显相关(P=0.034)。(3)MTT比色法检测显示, 4个化合物作用后对HeLa和SiHa细胞增殖均有抑制作用, 并均呈明显的浓度依赖性(P<0.01);化合物14a(6 μmol/L)联合奈达铂作用于HeLa、SiHa细胞48 h后, 其细胞增殖的抑制率明显高于单纯奈达铂作用后的细胞(P<0.01)。细胞划痕实验显示, 化合物14a(30 μmol/L)作用24 h后, HeLa、SiHa细胞迁移率分别为(19.6±0.6)%、(15.8±0.8)%, 均明显小于相应对照细胞[分别为(43.0±1.2)%、(29.3±1.0)%, P<0.01]。流式细胞仪检测显示, 化合物14a(30 μmol/L)作用48 h后, HeLa、SiHa细胞的凋亡率[分别为(16.3±1.1)%、(21.3±1.9)%]均明显高于相应对照细胞[分别为(1.8±0.3)%、(2.8±0.3)%;P<0.01];HeLa、SiHa细胞的G0/G1期比例均明显高于相应对照细胞(P<0.05), HeLa细胞的S期比例无明显变化(P=0.948)、G2/M期比例显著降低(P=0.042), 而SiHa细胞的S期比例显著降低(P=0.003)、G2/M期比例无明显变化(P=0.810)。结论σ1R蛋白在子宫颈癌和HSIL组织中呈过度表达, 且σ1R蛋白的胞核表达是子宫颈腺癌的重要特征, σ1R蛋白阳性表达尤其是胞核表达与子宫颈癌患者的不良预后有关。新合成的σ1R配体化合物14a可显著抑制子宫颈癌HeLa和SiHa细胞的增殖, 并提高细胞对奈达铂的敏感性, 抑制细胞迁移能力, 其可能通过诱导细胞凋亡和阻滞细胞周期而发挥抗肿瘤作用。
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单位南阳市中心医院; 郑州大学第二附属医院
