科研之友
微信
新浪微博
Facebook
分享链接
摘要
目的探讨人微小RNA(has-miR)-30a-5p调控Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路对胃癌细胞增殖及侵袭的影响及其作用机制。方法体外培养胃癌MKN-45细胞;在所研究胃癌细胞系中使用小干扰RNA(siRNA)转染建立miR-30a-5p的敲除和过表达模型, 胃癌MKN-45细胞分为3组:miR-30a-5p小干扰RNA(miR-30a-5p inhibitor)组, miR-30a-5p过表达RNA组和空白对照组(NC), 荧光定量聚合酶链反应(qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测Wnt/β-catenin信号通路相关标志物Cyclin D1(CCND1)基因的表达水平;双荧光素酶报告基因实验验证miR-30a-5p与Wnt信号通路下游关键基因CCND1的靶向调节关系;在培养的胃癌细胞MKN-45中加入Wnt/β-catenin信号通路抑制剂-银杏双黄酮, 分为miR-30a-5p inhibitor组、miR-30a-5p inhibitor+银杏双黄酮组、miR-30a-5p Inhibitor NC组及miR-30a-5p Inhibitor NC+银杏双黄酮组, 应用细胞计数试剂盒(CCK-8)实验验证各组细胞的增殖能力, 细胞迁移实验(Transwell)验证各组细胞的侵袭能力。各组间比较采用t检验。结果 qPCR实验结果显示过表达miR-30a-5p能够显著抑制CCND1在mRNA的表达(0.58±0.05, t=11.39, P<0.01), Western blot实验结果显示, CCND1蛋白水平, miR-30a-5p inhibitor组较NC组明显上升(284 437±2 127比215 273±4 097, t=25.95, P<0.01), miR-30a-5p mimics组较NC组明显下降(85 586±309比197 661±948, t=194.70, P<0.01);双荧光素酶实验结果显示过表达miR-30a-5p后野生组中WNT信号通路活性较对照组显著降低(0.39±0.03, t=13.96, P<0.01);CCK-8结果显示2 d后miR-30a-5p inhibitor+银杏双黄酮组细胞抑制率明显高于miR-30a-5p inhibitor组[(93.09±4.18)%比(146.42±5.80)%, t=12.92, P<0.01];miR-30a-5p Inhibitor NC+银杏双黄酮组细胞抑制率明显高于miR-30a-5p Inhibitor NC组[(53.80±3.54)%比(100.00±2.18)%, t=19.25, P<0.01]。Transwell结果显示miR-30a-5p inhibitor+银杏双黄酮组穿膜细胞量明显低于miR-30a-5p inhibitor组[(63.67±9.61)个比(100.00±10.44)个, t=4.44, P<0.05];miR-30a-5p Inhibitor NC+银杏双黄酮组穿膜细胞量明显低于miR-30a-5p Inhibitor NC组[(19.33±6.66)个比(45.00±4.58)个, t=5.50, P<0.01]。结论 miR-30a-5p可以调控Wnt/β-catenin信号通路, 过表达miR-30a-5p后可抑制Wnt/β-catenin信号通路降低胃癌细胞中Cyclin D1(CCND1)的表达, 进一步影响胃癌的增殖与侵袭。
-
单位滨州医学院附属医院; 滨州市人民医院
