微小RNA-146b-5p在小胶质细胞糖氧剥夺/复氧损伤中的作用与机制

作者：黄松; 汪雷; 周有东; 胡火军; 董元训; 马金阳

来源：微循环学杂志, 2022, 32(01): 35-40.

DOI：10.3969/j.issn.1005-1740.2022.01.006

• miR-146b-5p
• TRAF6
• 糖氧剥夺/复氧损伤
• 氧化应激
• 炎症反应

目的:探究微小RNA-146b-5p (miR-146b-5p)在小胶质细胞糖氧剥夺/复氧损伤(OGD/R)中的作用及机制。方法:建立小鼠小胶质细胞系EOC 13.31的OGD/R模型。将miR-146b-5p模拟物、miR-146b-5p抑制剂及相应的阴性对照，分别转染至EOC 13.31细胞中，然后再分别进行OGD/R处理，分别命名为OGD/R+miR-146b-5p mimic组、OGD/R+miR-146b-5p inhibitor组、OGD/R+NC mimic组和OGD/R+NC inhibitor组，以常规培养的细胞为对照组(Control组),只行OGD/R处理的细胞为OGD/R组，48h后检测相关指标。实时定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-146b-5p表达；采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞存活率；原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡率；酶联免疫吸附法(ELISA)测定超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)含量；蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测TRAF6蛋白表达；生物信息学和双荧光素酶报告基因实验分析miR-146b-5p和TRAF6之间的关系。结果:与Control组相比，OGD/R组中miR-146b-5p表达显著下调(P<0.01),TRAF6蛋白表达显著上调(P<0.01)。与OGD/R+NC mimic组比较，OGD/R+miR-146b-5p mimic组细胞存活率显著增高，凋亡率显著降低，MDA含量显著降低，SOD、CAT含量显著增高，TNF-α,IL-1β和IL-6含量显著降低，含TRAF6-WT的荧光素酶活性显著降低，TRAF6蛋白表达显著降低(P<0.05或P<0.01)。与OGD/R+NC inhibitor组比较，OGD/R+miR-146b-5p inhibitor组细胞的存活率显著降低，凋亡率显著升高，MDA含量显著增高，SOD、CAT含量显著降低，TNF-α,IL-1β和IL-6含量显著升高，TRAF6蛋白表达显著增加(P<0.05或P<0.01)。结论:miR-146b-5p通过靶向TRAF6促进小胶质细胞OGD/R模型细胞存活，抑制细胞凋亡，减轻氧化应激和炎症反应。

• 单位
  三峡大学; 宜昌市中心人民医院