阳春砂萜类合酶AvTPS1启动子的克隆及其活性分析

作者：王虹; 李萌; 马东明; 叶鹏; 詹若挺; 杨锦芬^*

来源：中草药, 2019, 50(09): 2181-2187.

• AvTPS1
• 启动子
• 阳春砂
• 瞬时表达
• FPNI-PCR

目的获得药用植物阳春砂Amomumvillousm的萜类合酶基因Av TPS1的启动子并进行活性分析。方法从阳春砂叶片基因组DNA(g DNA)中克隆获得Av TPS1基因,再通过FPNI-PCR的方法从阳春砂叶片g DNA中克隆Av TPS1的启动子并进行序列分析,构建由该启动子驱动β-葡萄糖苷酸酶基因(GUS)的重组表达载体p CAM-Av TPS1p,利用农杆菌介导法注射侵染烟草Nicotianabenthamiana叶片进行瞬时表达来验证Av TPS1启动子的活性。结果获得Av TPS1的g DNA序列长度为2444 bp,经过序列比对发现Av TPS1含有7个外显子和6个内含子;通过FPNI-PCR成功获得568bp的Av TPS1启动子序列,其含有10种顺式作用元件,包括保守元件TATA-box和CAAT-box,以及可被转录因子MYC结合的G-box等;通过GUS染色发现Av TPS1启动子启动了GUS基因的表达,使转基因烟草叶片呈现蓝色。结论 Av TPS1启动子被成功克隆,且通过实验验证其具有启动基因表达的功能,为进一步研究Av TPS1在萜类合成途径的功能及其受转录因子调节的机制奠定了基础。

• 单位
  国家中成药工程技术研究中心; 广州中医药大学