CDK4基因在骨肉瘤细胞中的表达及功能研究

作者：李健雄; 韩雨辰; 杜祎萌; 薛春源; 郑亚男; 亢小峰; 房廖鑫; 许猛; 徐小洁; 毕文志^*

来源：解放军医学院学报, 2023, 44(09): 986-992.

• GEO数据库
• CDK4基因
• 骨肉瘤
• 聚合酶链反应
• 荧光定位

背景 细胞周期蛋白依赖性激酶4(cyclin dependent kinase 4,CDK4)属于丝氨酸/苏氨酸激酶家族，是许多癌症的潜在治疗靶点，但其在骨肉瘤中的表达水平及功能尚不清楚，有待深入研究。目的 本研究旨在探索CDK4基因在骨肉瘤细胞中的表达水平，并验证该基因与骨肉瘤细胞增殖和迁移的关系。方法 选择GEO数据库中与骨肉瘤相关的基因表达谱芯片数据，对比数据集内两组样品骨肉瘤MG63细胞系及正常成骨细胞HOB细胞系的数据，分析CDK4基因在两组间的表达差异。使用人乳腺文库作模板，利用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)将人CDK4基因的CDS区编码序列进行扩增得到扩增产物。将扩增产物插入pEGFP-C1载体中，得到重组质粒，再将此重组质粒转染至MG63细胞内，利用蛋白质免疫印迹(Western blot)方法检测质粒的表达情况，并用荧光显微镜观察带有荧光标记的CDK4蛋白在细胞中的定位。通过CCK-8、克隆形成及划痕实验研究转染CDK4重组质粒的人骨肉瘤MG63细胞的增殖和迁移情况。结果 基因表达谱芯片数据集分析显示，CDK4在MG63细胞系中的表达水平显著高于HOB细胞系。将获得的质粒进行双酶切和测序，成功构建pEGFP-CDK4真核表达载体；Western blot证明目的蛋白成功表达；荧光显微镜观察发现CDK4定位在细胞核中；CCK-8、克隆形成和划痕实验的结果显示，过表达pEGFP-CDK4能促进MG63细胞的增殖和迁移。结论 CDK4在人骨肉瘤MG63细胞系中的表达水平高于正常成骨细胞HOB细胞系。CDK4蛋白定位于MG63细胞核中，可能有助于促进骨肉瘤细胞的增殖和迁移。

• 单位
  解放军总医院