芹菜过敏原蛋白Api g1.02的克隆、表达及单抗制备

作者：王海艳; 袁飞; 吴亚君; 杨海荣; 李刚; 陈颖

来源：中国食品学报, 2012, (05): 144-148.

DOI：10.16429/j.1009-7848.2012.05.006

• 芹菜过敏原蛋白Apig1.02
• 克隆
• 蛋白表达
• 单克隆抗体 Celery allergen Api g1.02
• cloning
• protein expression
• monoclonal antibody

提取芹菜总RNA,反转录PCR(RT-PCR)扩增出过敏原蛋白Apig1.02基因,经PCR、酶切和序列测定后,得到重组质粒pET-32a-Apig1.02。将重组质粒转化到BL21(DE3)pLys感受态细胞中,用1mmol/L异丙基硫代-B-D-半乳糖苷(IPTG)对转化菌进行诱导表达及SDS-PAGE分析后,将表达蛋白提取纯化,制备单克隆抗体并进行Western blot分析。结果表明芹菜过敏原蛋白Apig1.02在体外获得了高效表达,表达融合蛋白分子质量约35ku,诱导6h后表达量最高,占菌体总蛋白的40%左右;制备的单克隆抗体能与表达蛋白发生免疫印迹反应,说明所表达的蛋白具有良好的免...

• 单位
  中国检验检疫科学研究院; 内蒙古出入境检验检疫局