复合益生菌产品菌种鉴定及活菌定量检测方法

作者：周立光; 杨明喆; 冯会粉; 刘艺茹; 刘蕊; 张欣; 葛媛媛; 张旭光; 刘佳奇; 程坤; 于学健; 姚粟^*

来源：食品与发酵工业, 2022, 48(09): 235-244.

DOI：10.13995/j.cnki.11-1802/ts.028734

• 益生菌
• 宏基因组
• 分箱
• 叠氮溴化丙锭
• 定量PCR
• 活菌数

复合益生菌产品的菌种组成与活菌数是产品质量的关键，该研究以2种市售复合益生菌固体饮料及其添加的5种(6株)益生菌为研究对象，采用宏基因组测序分析方法及平均核苷酸一致性(average nucleotide identity, ANI)在种水平上精确鉴定产品的菌种组成；通过筛选菌种特异性引物，优化叠氮溴化丙锭-荧光定量PCR (propidium monoazide-quantitative PCR,PMA-qPCR)方法参数，快速定量产品中每种益生菌的活菌数。结果表明，产品1宏基因组数据分箱获得的4个bins分别被鉴定为动物双歧杆菌乳亚种、鼠李糖乳杆菌、发酵乳杆菌和短双歧杆菌，PMA-qPCR定量检测其活菌数分别为4.86×109、4.33×109、3.95×108和6.38×106 CFU/g;产品2宏基因组数据分箱获得的4个bins分别被鉴定为鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌、发酵乳杆菌、动物双歧杆菌乳亚种，PMA-qPCR定量检测其活菌数分别为3.12×109、1.53×109、9.36×108和4.16×108 CFU/g。PMA-qPCR方法定量2种产品乳酸菌的活菌总数与平板菌落计数结果相比，差异不显著(P>0.05);该研究在菌种水平上精确鉴定的产品微生物组成与产品声称一致。除短双歧杆菌外，其他5种菌的活菌数检测结果与实际添加量基本吻合。该研究在实现精确鉴定产品物种组成的同时，快速、特异、准确的定量了产品中每种乳酸菌的活菌数，为复合益生菌产品的质量控制提供了技术支持。

• 单位
  中国食品发酵工业研究院有限公司