circSERPINE2靶向miR-106b-5p对缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤的影响

作者：魏薇; 王文斌^*; 刘秀梅

来源：中华细胞与干细胞杂志(电子版), 2021, 11(05): 284-291.

• 心肌细胞
• circRNA
• miR-106b-5p
• 细胞凋亡
• 氧化应激

目的探讨circSERPINE2对缺氧/复氧 (H/R)诱导的心肌细胞损伤的影响及机制。方法体外培养大鼠心肌细胞H9c2,分为对照组 (用常规培养基置于常规培养箱中培养7 h)、H/R组[无血清低糖DMEM培养基缺氧 (不含氧)培养3 h后,10﹪ FBS的DMEM培养基复氧 (19.95﹪氧)培养4 h]、H/R+pcDNA组 (转染pcDNA至H9c2细胞后进行H/R处理)、H/R+pcDNA-circSERPINE2组 (转染pcDNA-circSERPINE2至H9c2细胞后进行H/R处理)、H/ R+anti-miR-NC组 (转染anti-miR-NC至H9c2细胞后进行H/R处理)、H/R+anti-miR-106b-5p组 (转染anti-miR-106b-5p至H9c2细胞后进行H/R处理)、H/R+pcDNA-circSERPINE2+ miR-NC组 (共转染pcDNA-circSERPINE2和miR-NC至H9c2细胞后进行H/R处理)和H/ R+pcDNA-circSERPINE2+miR-106b-5p组 (共转染pcDNA-circSERPINE2和miR-106b-5p mimics至H9c2细胞后进行H/R处理)。用RT-qPCR法检测细胞中circSERPINE2和miR-106b-5p表达,流式细胞术检测细胞凋亡,免疫印迹法检测细胞中cleaved caspase-3和cleaved caspase-9蛋白表达,试剂盒检测细胞中MDA含量、SOD和GSH-Px活性。双荧光素酶报告基因实验检测circSERPINE2和miR-106b-5p调控关系。方差齐性,两组间比较用t检验;方差不齐,两组间比较用t’检验。结果与对照组比较,H/R组H9c2细胞中circSERPINE2表达 (1.00±0.06比0.43±0.04)、SOD[(77.84±6.49)U/mL比(23.19±2.21) U/ mL]和GSH-Px活性[(59.21±5.31) U/mL比(17.62±1.53)U/mL]均降低,而miR-106b-5p表达 (1.00±0.07比2.66±0.23)、细胞凋亡率[(6.53±0.52)﹪比 (24.21±2.18)﹪]、cleaved caspase-3(0.24±0.02比0.72±0.05)、cleaved caspase-9蛋白表达 (0.13±0.02比0.65±0.04)和MDA含量[(5.23±0.47)nmol/L比 (45.56±4.33)nmol/L]均升高,差异有统计学意义 (P 均 < 0.05)。与H/R+pcDNA组比较,H/R+pcDNA-circSERPINE2组H9c2细胞凋亡率[(26.34±2.23)﹪比 (10.08±0.81)﹪]、cleaved caspase-3 (0.75±0.05比0.32±0.04)和cleaved caspase-9蛋白表达(0.67±0.05比0.25±0.03)及MDA含量[(49.18±4.89) nmol/L比(6.79±0.59) nmol/L]均降低,而SOD[(21.42±2.03) U/ mL比(63.57±6.44)U/mL]和GSH-Px活性[(16.06±1.42) U/ mL比(47.94±5.52)U/mL]均升高,差异有统计学意义 (P 均 < 0.05)。与H/R+anti-miR-NC组比较,H/R+anti-miR-106b-5p组H9c2细胞凋亡率[(26.23±2.15)﹪比(13.87±1.26)﹪]、cleaved caspase-3 (0.78±0.06比0.38±0.03)和cleaved caspase-9蛋白表达(0.68±0.05比0.31±0.03)及MDA含量[(48.38±4.21)nmol/L比(11.39±1.42)nmol/L]均降低,而SOD[(22.19±2.21) U/ mL比(54.33±5.25)U/mL]和GSH-Px活性[(15.84±1.68) U/ mL比(40.42±3.51)U/ mL]均升高,差异有统计学意义 (P 均 < 0.05)。circSERPINE2靶向结合并负调控miR-106b-5p表达。与H/R+pcDNA-circSERPINE2+miR-NC组比较,H/R+pcDNA-circSERPINE2+miR-106b-5p组H9c2细胞细胞凋亡率[(9.86±1.04)﹪比(18.47±1.24)﹪]、cleaved caspase-3 (0.31±0.03比0.66±0.04)、cleaved caspase-9蛋白表达 (0.23±0.02比0.56±0.06)及MDA含量[(6.56±0.61)nmol/L比 (36.97±3.14) nmol/ L,P < 0.05]均升高,而SOD[(64.14±6.32)U/ mL比(32.26±3.58)U/mL]和GSH-Px活性[(48.40±5.06)U/mL比 (25.58±3.11)U/mL]均降低,差异有统计学意义 (P 均 < 0.05)。结论上调circSERPINE2可抑制H/R诱导的大鼠心肌细胞凋亡及氧化应激反应,其作用机制可能通过靶向下调miR-106b-5p表达有关。

• 单位
  北京市大兴区人民医院