嵌合抗原受体T细胞靶向LMP1抗原治疗EB病毒阳性淋巴瘤的功能研究

作者：何慧珍; 邢妍妍; 张瑜; 徐颖茜; 田征; 邢海燕; 唐克晶; 饶青; 王建祥; 王敏^*

来源：中华血液学杂志, 2022, 43(03).

• EB病毒
• LMP1抗原
• 嵌合抗原受体T细胞

目的制备一种靶向LMP1抗原的嵌合抗原受体T细胞(CAR-T细胞), 研究其对EB病毒(EBV)阳性淋巴瘤的免疫治疗作用。方法应用分子克隆技术构建二代LMP1 CAR表达质粒, 通过慢病毒包装体系包装病毒后感染人T细胞, 获得LMP1 CAR-T细胞, 体外实验验证LMP1 CAR-T细胞对感染EBV后的LMP1阳性淋巴瘤细胞的特异性细胞毒性作用。结果①LMP1蛋白表达于EBV阳性的淋巴瘤细胞表面;②成功构建了二代LMP1 CAR慢病毒载体, 感染人T细胞, 获取LMP1 CAR-T细胞, 感染效率大于80%;③LMP1 CAR-T细胞可特异性杀伤LMP1阳性淋巴瘤细胞, 当效靶比按4∶1共培养48 h后, LMP1 CAR-T细胞对Raji细胞的杀伤作用增强, 对Ramos细胞无明显杀伤作用;④与LMP1阳性淋巴瘤细胞按1∶1共培养5 h后, LMP1 CAR-T细胞处理组CD107a+ T细胞比例显著高于Vector-T细胞组[(13.25±2.94)%对(1.55±0.05)%, t=3.972, P=0.017], 脱颗粒效果增强;⑤与LMP1阳性淋巴瘤细胞共培养后, LMP1 CAR-T细胞组CD69+、CD25+ T细胞比例显高于Vector-T细胞组[(7.40±0.41)%对(3.48±0.47)%, t=6.268, P=0.003;(73.00±4.73)%对(57.67±2.60)%, t=2.842, P=0.047], 活化效应增强。⑥与LMP1阳性淋巴瘤细胞共培养后, LMP1 CAR-T细胞组细胞因子分泌增强, 高于Vector-T细胞组[IFN-γ:(703±73)ng/L对(422±87)ng/L, t=2.478, P=0.068;TNF-α:(215±35)ng/L对(125±2)ng/L, t=2.536, P=0.064]。结论该研究证实EBV阳性淋巴瘤细胞表面可特异表达LMP1蛋白, 成功构建了LMP1 CAR慢病毒载体并感染人T细胞, 成功获得LMP1 CAR-T细胞。体外实验证实:与LMP1阳性淋巴瘤细胞共培养后, LMP1 CAR-T细胞脱颗粒效果增强, 活化效应增强, 高效分泌细胞因子, 可特异杀伤LMP1阳性淋巴瘤细胞, 具有潜在的临床应用前景。

• 单位
  中国医学科学院血液学研究所; 实验血液学国家重点实验室; 中国医学科学院北京协和医学院