MAGE-A 3基因对宫颈癌细胞增殖及侵袭的影响及其机制探讨

作者：李青; 马英; 何海鹏; 石若冰; 王琰; 张惠; 梁义娟; 畅惠; 高新萍^*

来源：肿瘤, 2020, 40(03): 185-198.

• 宫颈肿瘤
• 黑素瘤特异性抗原
• 细胞增殖
• 细胞运动
• 上皮-间质转化

目的:研究黑素瘤相关抗原A3(melanoma-associated antigen-A3,MAGE-A 3)基因对宫颈癌细胞增殖及侵袭能力的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 :首先采用实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测宫颈癌HeLa和Siha细胞中MAGE-A3 mRNA和蛋白的表达水平。再分别用携带有MAGE-A3基因的慢病毒(LV-MAGE-A3)感染Siha细胞,构建过表达MAGE-A3基因的细胞株(Siha-MAGE-A3细胞);用携带有靶向MAGE-A3基因的siRNA(siRNA-MAGE-A3)转染HeLa细胞,构建沉默MAGE-A3基因表达的细胞株(HeLa-siRNA-MAGE-A3细胞);实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测转染效率。采用细胞克隆形成实验和CCK-8法检测过表达或沉默MAGE-A 3基因表达对HeLa和Siha细胞克隆形成和增殖能力的影响;Transwell侵袭实验和细胞划痕愈合实验检测过表达或沉默MAGE-A3基因表达对HeLa和Siha细胞侵袭和迁移能力的影响;实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测过表达或沉默MAGE-A3基因对宫颈癌细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(vimentin)表达的影响;蛋白质印迹法检测磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,PBK,又称AKT)通路关键分子AKT及磷酸化AKT(phospho-AKT,p-AKT)表达水平的变化。结果 :MAGE-A3基因在HeLa细胞中的表达被沉默,在Siha细胞中被成功过表达。与对照组和阴性对照组相比,MAGE-A3基因过表达Siha-MAGE-A3细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显增强(P值均<0.01),E-cadherin蛋白的表达水平下调(P <0.05),N-cadherin、vimentin和p-AKT蛋白的表达水平上调(P值均<0.01);与此相反,MAGE-A3基因沉默后,HeLa-siRNA-MAGE-A3细胞的增殖、迁移和侵袭能力受到明显抑制(P值均<0.01),E-cadherin蛋白的表达水平上调(P <0.05),N-cadherin、vimentin和p-AKT蛋白的表达水平下调(P值均<0.01)。结论 :过表达MAGE-A3基因可以促进宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,沉默MAGE-A3基因可抑制宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭;其机制可能涉及EMT和PI3K-AKT信号通路的激活。

• 单位
  河北大学附属医院; 深圳市萨米医疗中心