复方扶芳藤合剂含药血清对大鼠体外模拟“造血龛”中造血干细胞增殖的影响

作者：周倍伊; 万娟; 周围; 谢金玲; 钟卫干; 杨力强; 罗眈; 黄铠琴

来源：广西中医药, 2020, 43(01): 63-68.

• 复方扶芳藤合剂
• 造血干细胞
• 骨髓间充质干细胞
• 造血龛
• 干细胞增殖

目的:通过体外共培养大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)和造血干细胞(HSC)模拟"造血龛",观察BMSCs+HSC Transwell共培养和BMSCs+HSC接触共培养模拟的"造血龛"中BMSCs对HSC生长的影响;将复方扶芳藤合剂含药血清及空白血清加入模拟的"造血龛"中,观察药物对HSC生长的影响。方法:采用全骨髓贴壁法体外培养SD雄性大鼠骨髓间充质干细胞至P3代,流式细胞仪检测其表面标志物,进行BMSCs鉴定。用MACS磁珠分选仪分选SD大鼠骨髓CD90.1+细胞(造血干细胞),流式细胞仪检测其表面标志物,进行HSC鉴定。将BMSCs和HSC共培养:Transwell共培养组(上室接种HSC、下室接种BMSCs),2D接触共培养组(在24孔板同时接种HSC与BMSCs),均连续培养7 d,期间每隔两天使用荧光显微镜观察"龛"中HSC的形态及细胞数量,使用CCK-8法检测"龛"中HSC吸光度值,绘制生长曲线;采用20%浓度的复方扶芳藤合剂含药血清和空白血清连续7 d对各组"龛"中干细胞进行干预,期间每隔两天用使用荧光显微镜观察各组"龛"中HSC的形态及细胞数量,CCK-8法检测各组"龛"中HSC吸光度值,绘制生长曲线,对比各组生长曲线的变化,分析各组"龛"中HSC生长情况。结果:BMSCs具有典型的成纤维样细胞形态,集落生长呈漩涡状。P3代BMSCs表型CD29、CD44、CD34、CD45表达分别为99.709%、99.734%、0.114%、0.013%。HSC在荧光显微镜下激发呈绿色荧光的均一圆形。HSC荧光显微镜下观测及生长曲线显示:各组"龛"中HSC数量均随着培养时间的增加而增加(P<0.05);自第5 d起,Transwell共培养组、2D接触共培养组的HSC吸光度值高于HSC单独培养组(P<0.05);含药血清Transwell共培养组的HSC吸光度值高于空白血清Transwell共培养组(P<0.05),含药血清2D接触共培养组HSC吸光度值高于Transwell共培养组(P<0.05)。结论:全骨髓贴壁法分离培养的BMSCs具有间充质干细胞的生物学特性。MACS磁珠分选可快速获得高纯度HSC;与单独培养的HSC组相比,Transwell共培养模拟"龛"组、2D接触共培养模拟"龛"组内的BMSCs均能促进HSC增殖,2D接触共培养组更为明显;复方扶芳藤合剂含药血清能进一步增强模拟"龛"中BMSCs促进HSC增殖能力,对2D接触共培养组促HSC增殖强度比对Transwell共培养组更为明显。

• 单位
  基础医学院; 广西中医药大学