基于LAMP技术的弧菌快速检测方法的建立

作者：张芳芳

来源：湖南农业科学, 2022, (04): 1-5.

DOI：10.16498/j.cnki.hnnykx.2022.004.001

• 环介导等温扩增技术
• 弧菌
• 快速检测
• 方法建立

研究基于弧菌属16S rRNA保守基因片段设计引物，利用恒温条件进行扩增，建立并优化了弧菌属环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification，LAMP)检测方法，在LAMP检测方法最优条件下，验证LAMP方法的特异性、灵敏度和实际应用性。结果表明：最佳反应条件为反应温度61℃、Mg2+、dNTPs和甜菜碱的浓度分别为4 mmol/L、1.8 mmol/L和0.4 mol/L；在最佳检测条件下，以4种弧菌(溶藻弧菌、哈维氏弧菌、副溶血弧菌、创伤弧菌)和8种其他菌株作为验证模板，发现该方法仅对弧菌有阳性扩增结果，证明该方法具有较高的特异性；同时，该方法对创伤弧菌DNA的最小检出量为940 fg/μL，其检测下限比常规PCR法降低了2个数量级。该研究成功建立了弧菌属细菌的快速检测方法，且方法具有良好的特异度和敏感度，为弧菌的快速检验提供了技术支撑。