泛素特异性蛋白酶46的分子克隆及基因突变对其功能的影响

作者：张景坤; 张玮; 魏群; 祁素芬; 秘迎君; 贾媛; 吕红芝; 赵静; 刘淑霞

来源：中国细胞生物学学报, 2018, 40(06): 937-944.

• 基因克隆
• usp46
• 基因表达水平
• 酶活性
• 基因突变

该文探讨了行为绝望相关基因—泛素特异性蛋白酶46(usp46)基因的生物学功能及编码区错义突变对其功能的影响。从人类食管癌细胞株TE-1中提取总RNA,RT-PCR扩增获得人类usp46基因,q RT-PCR检测小鼠各组织中该基因的m RNA相对表达水平;运用去泛素化酶活性检测体系,将USP46与模型底物表达质粒共转化,研究USP46的活性;采用定点突变法构建错义突变V89I,用上述方法检测突变对酶活性的影响。结果发现,人类usp46基因具有1 101 bp的开放阅读框,编码366个氨基酸;序列比对显示,其在各个物种中高度保守;在小鼠脾脏中m RNA表达量较高,而骨骼肌中表达较少;人类的USP46蛋白具有去泛素化酶活性,V89I突变后,其活性显著下降,仅为野生型的37.67%±2.52%(P<0.05)。结果表明,usp46基因在小鼠各组织中的m RNA表达水平存在差异;人类USP46蛋白具有去泛素化酶活性,而且其编码区V89I错义突变后,其活性显著下降,为抑郁症等神经精神性疾病的病因学研究提供了新的线索。

• 单位
  河北省人民医院; 河北医科大学; 河北医科大学第三医院; 河北医科大学第二医院