关岭牛MyoD1与MSTN基因相互表达调控

作者：田念念; 李雄; 黄勇; 石鹏飞; 孙金魁; 许厚强^*

来源：生物技术, 2021, 31(05): 417-424.

DOI：10.16519/j.cnki.1004-311x.2021.05.0063

• 关岭牛
• MyoD1
• MSTN
• 过表达
• 双荧光素酶
• 启动子

[目的]旨在验证牛MyoD1与MSTN在表达调控上的相互作用。[方法]首先,以构建的p EGFP-N3-MyoD1和p EGFP-N3-MSTN过表达载体,分别在两组关岭牛原代成肌细胞中过表达MyoD1和MSTN,细胞转染24 h后,qRT-PCR检测并分析各处理组细胞中MyoD1和MSTN相比表达情况。其次,以海肾荧光载体pRL-TK为内参质粒,在转染p GL-3-MSTN-pro质粒的关岭牛原代成肌细胞中过表达MyoD1,在转染p GL-3-MyoD1-pro质粒的关岭牛原代成肌细胞中过表达MSTN,共转染36 h后,双荧光素酶试剂盒检测分析各组细胞中相对荧光素酶活性变化。[结果]过表达MyoD1组细胞中MyoD1相对表达量相比对照组上调至8 283.987±2 337.534(P=0.004),MSTN的相对表达量上调至7.849±1.089 (P=0.000 4);而MSTN过表达组细胞中MSTN相对表达量相比对照组上调至121 131.802±12 474.046(P=0.004),MyoD1基因的相对表达量下调至0.103±0.016(P=0.000 1)。进一步试验中,过表达MyoD1组细胞中相对荧光素酶活性变化相比对照组从1.131±0.051上调至3.030±0.212(P=0.0001);而过表达MSTN组细胞中相对荧光素酶活性变化相比对照组从1.797±0.136下调至0.543±0.092(P=0.000 2)。[结论]MyoD1的过量表达(P=0.004),会导致MSTN表达显著上调(P=0.000 4);而MSTN的过量表达(P=0.004),可负向调节MyoD1表达(P=0.000 1)。此外MyoD1的过表达会增强MSTN启动子活性(P=0.000 1);而MSTN的过表达会降低MyoD1启动子活性(P=0.000 2)。综上,MyoD1可正向调控MSTN表达,而MSTN也对MyoD1表达起负反馈调节作用。

• 单位
  贵州大学; 动物科学学院