下调lncRNA NONRATT021972调控TLR4对糖脂毒性诱导的胰岛β细胞炎症反应

作者：郑翔宇; 付宗强; 张艳敏; 郭伟胜^*

来源：医学研究生学报, 2021, 34(11): 1150-1157.

DOI：10.16571/j.cnki.1008-8199.2021.11.006

• 胰岛β细胞
• 糖脂毒性
• NONRATT021972
• Toll样受体4
• 炎症

目的 关于lncRNA NONRATT021972在糖尿病中表达上调对胰岛β细胞影响的研究较少。文中旨在探讨下调lncRNA NONRATT021972调控Toll样受体4(TLR-4)对糖脂毒性诱导的胰岛β细胞炎症因子表达的影响。方法 将胰岛β细胞NIT-1分成对照组(正常培养的胰岛β细胞)、模型组(用25mmol/L葡萄糖、0.25mmol/L棕榈酸的细胞培养液处理)、sh-NC组(转染shRNA control,然后用25mmol/L葡萄糖、0.25mmol/L棕榈酸处理细胞)、sh-NONRATT021972组(转染sh-NONRATT021972,然后用25mmol/L葡萄糖、0.25mmol/L棕榈酸处理细胞)。PCR方法检测NONRATT021972、TLR4和TNF-α、IL-6、IL-1β mRNA表达; CCK-8实验检测细胞增殖活性变化;流式细胞术检测细胞凋亡变化; Western blot检测C-Caspase-3、C-Caspase-9、TLR4、TNF-α、IL-6、IL-1β蛋白表达。在胰岛β细胞中分别将NONRATT021972 shRNA、阴性对照载体和NONRATT021972 shRNA、TLR4过表达载体共转染,用含有25mmol/L葡萄糖、0.25mmol/L棕榈酸的细胞培养液处理,分为sh-NONRATT021972+NC组(共转染NONRATT021972 shRNA和空载体,高糖高脂诱导)和sh-NONRATT021972+TLR4组(共转染NONRATT021972 shRNA和TLR4过表达载体,高糖高脂诱导)。Western blot检测C-Caspase-3、C-Caspase-9、TLR4、TNF-α、IL-6、IL-1β蛋白表达。结果 与对照组胰岛β细胞中NONRATT021972表达水平(1.00±0.11)比较,模型组(2.47±0.12)明显升高(P<0.001);与sh-NC组NONRATT021972表达水平(2.45±0.23)比较,sh-NONRATT021972组(1.12±0.16)明显降低(P<0.001)。与对照组比较,模型组胰岛β细胞增殖活性降低,细胞凋亡率升高,细胞中C-Caspase-3、C-Caspase-9蛋白表达及TNF-α、IL-6、IL-1β mRNA和蛋白水平升高(P<0.05);与sh-NC组比较,sh-NONRATT021972组胰岛β细胞增殖活性升高,细胞凋亡率降低,细胞中C-Caspase-3、C-Caspase-9蛋白及TNF-α、IL-6、IL-1β mRNA和蛋白表达降低(P<0.05)。与sh-NONRATT021972+NC组比较,sh-NONRATT021972+TLR4组胰岛β细胞增殖活性降低(P<0.05),细胞凋亡率增加(P<0.05),细胞中C-Caspase-3、C-Caspase-9蛋白及TNF-α、IL-6、IL-1β mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论 下调NONRATT021972通过降低TLR4的表达减少糖脂毒性诱导胰岛β细胞炎症因子表达和细胞凋亡,提高细胞增殖活性,为分子靶向治疗糖尿病提供了思路。

• 单位
  河南省中医院