siRNA沉默MRP5基因对人肝癌细胞HepG2多药耐药性的影响

作者：杨尚霖; 刘建平; 刘波; 苏正; 韦金星; 张克韬

来源：中华肝脏外科手术学电子杂志, 2016, 5(02): 124-128.

• 癌,肝细胞
• 多药耐药相关蛋白质类
• 抗药性,肿瘤
• 核糖核酸酶类

目的探讨si RNA沉默多药耐药相关蛋白(MRP)5基因对人肝癌耐药细胞多药耐药性的影响。方法构建人肝癌耐药细胞Hep G2/表柔比星(ADM),合成MRP5-si RNA片段,使用Lipofectamine 2000脂质体转染细胞。实验分3组,si RNA组为Hep G2/ADM转染MRP5-si RNA,耐药组为Hep G2/ADM细胞,普通组为肝癌细胞Hep G2。MTT法检测细胞对化疗药物的敏感性,实时荧光定量RT-PCR检测MRP5基因m RNA相对表达量,Western blot法检测MRP5蛋白表达,流式细胞术检测细胞凋亡情况。多组比较采用单因素方差分析,两组间比较采用LSD-t检验或t检验。结果 si RNA组细胞对ADM、氟尿嘧啶(5-FU)和奥沙利铂(OXA)的半抑制浓度(IC50)分别为(0.180±0.008)、(1.657±0.014)、(0.055±0.007)mg/L,耐药组相应为(0.317±0.035)、(3.785±0.523)、(0.129±0.009)mg/L,普通组相应为(0.022±0.008)、(0.163±0.010)、(0.080±0.012)mg/L,耐药组对3种化疗药物的IC50明显高于普通组(t=14.202,11.993,13.937;P<0.05),si RNA组明显低于耐药组(LSD-t=-6.609,-7.044,-11.257;P<0.05)。si RNA组、耐药组、普通组细胞的MRP5 m RNA相对表达量分别为1.377±0.141、3.858±0.481、1.000±0.374,耐药组较普通组明显升高(LSD-t=9.600,P<0.05),si RNA组较耐药组明显降低(LSD-t=-11.669,P<0.05)。si RNA组、耐药组、普通组细胞MRP5蛋白灰度值分别为816、2 245、58,耐药组较普通组明显增强,si RNA组较耐药组明显减弱。si RNA组细胞凋亡率为(25.1±3.7)%,明显高于耐药组的(3.3±0.7)%(t=9.950,P<0.05)。结论 MRP5与人肝癌细胞的多药耐药性相关,si RNA沉默MRP5基因可以上调肝癌细胞对化疗药物的敏感性。

• 单位
  中山大学附属第三医院; 中山大学孙逸仙纪念医院