柔嫩艾美耳球虫真核起始因子5和5A基因的克隆表达及转录动态分析

作者：苟灵俏; 龚振兴; 于三科; 殷昊; 马雪婷; 蔡建平; 林青

来源：畜牧兽医学报, 2014, 45(12): 2019-2027.

• 柔嫩艾美耳球虫
• 真核起始因子
• 基因克隆
• 表达差异
• qRT-PCR

旨在研究柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)真核起始因子5(EteIF5)和5A(EteIF5A)的功能,克隆、表达并分析EteIF5和EteIF5A在E.tenella广东株不同发育阶段的表达量变化。根据E.tenella基因组数据预测的编码序列设计引物,采用RT-PCR方法克隆EteIF5和EteIF5A的ORF,插入酶切位点后连接到原核表达载体pMAL-c2x进行诱导表达。提取E.tenella5个发育阶段(/时期)的总RNA,使用qRT-PCR检测EteIF5和EteIF5A转录的动态变化。测序结果表明,克隆获得的EteIF5和EteIF5A ORF全长分别为1 248和486bp,各自编码315和161个氨基酸,均在大肠埃希菌表达系统中成功表达。qRT-PCR定量分析显示,eIF5和eIF5A的mRNA在E.tenella不同发育阶段转录量不同,子孢子阶段最高,在孢子化卵囊阶段最低。首次克隆获得了E.tenella eIF5和eIF5A ORF,揭示EteIF5和EteIF5A mRNA的转录量在不同发育阶段有显著差异。试验结果为进一步研究EteIF5和EteIF5A的功能,从EteIF5A合成途径研制新型抗球虫药提供了试验基础。

• 单位
  西北农林科技大学; 中国农业科学院兰州兽医研究所; 家畜疫病病原生物学国家重点实验室