结核分枝杆菌H37Ra热休克蛋白16.3敲除菌株对小鼠骨髓来源巨噬细胞炎性细胞因子表达及趋化功能的影响

作者：蒙祖迪; 张焱皓; 亓凯; 卫麟娜; 高雪涵; 罗军敏^*

来源：遵义医科大学学报, 2023, 46(04): 335-342.

DOI：10.14169/j.cnki.zunyixuebao.2023.0050

• 结核分枝杆菌
• 热休克蛋白16.3
• 巨噬细胞
• 炎性细胞因子
• 趋化因子

目的 初步探讨结核分枝杆菌H37Ra热休克蛋白16.3敲除菌株对小鼠骨髓来源巨噬细胞炎性细胞因子表达及趋化功能的影响。方法 从BALB/c小鼠胫腓骨中提取骨髓细胞，与GM-CSF共培养获得骨髓来源的巨噬细胞，流式细胞术检测巨噬细胞表面F4/80和CD11b的表达；分别用H37Ra野生型菌株(WT)、H37Ra热休克蛋白16.3回补菌株(COMP)、H37Ra热休克蛋白16.3敲除菌株(MUT)感染小鼠骨髓来源巨噬细胞，Real-time PCR检测巨噬细胞炎性细胞因子TNF-α、IL-6和iNOS以及趋化因子CCL2、CCL3、CCL4、CCL5和CCL12 mRNA的相对表达水平；ELISA以及Western blot检测TNF-α、IL-6和iNOS的表达水平；Transwell实验检测巨噬细胞的趋化功能；流式细胞术检测F4/80+CCR1+、F4/80+CCR2+和F4/80+CCR5+的细胞数量。结果 F4/80+CD11b+的细胞数量占比为97.8%,提示小鼠骨髓来源巨噬细胞诱导成功；相较于WT和COMP菌株感染组，在感染巨噬细胞3 h后MUT感染组CCL2、CCL3、CCL4、CCL5和CCL12 mRNA的相对表达水平上调，继续感染24 h,相较于WT和COMP菌株感染组，MUT菌株感染组TNF-α和IL-6mRNA的相对表达水平更高，各感染组间iNOS mRNA的相对表达水平没有差异，而在感染48 h后，各感染组间TNF-α和IL-6mRNA的相对表达水平没有差异，MUT菌株感染组相较于WT和COMP菌株感染组iNOSmRNA的相对表达水平更低；ELISA结果显示TNF-α和IL-6的分泌水平在各感染组间没有差异；Western blot结果显示iNOS的表达在各感染组间也没有明显差异；Transwell实验结果显示，MUT感染组能够趋化更多数量的巨噬细胞至下室；流式结果显示，各感染组间F4/80+CCR1+的细胞数量没有差异，MUT菌株感染组F4/80+CCR2+和F4/80+CCR5+的细胞数量相较于WT和COMP菌株感染组明显上调。结论 MTB Hsp16.3能在基因表达水平调控小鼠骨髓来源巨噬细胞炎性细胞因子TNF-α、IL-6和iNOS的表达且可能通过CCL3、CCL4、CCL5/CCR5和CCL2、CCL12/CCR2抑制小鼠骨髓来源巨噬细胞的趋化功能。

• 单位
  遵义医科大学