miR-16-5p靶向NLRP1抑制缺氧复氧诱导的BRL-3A细胞焦亡

作者：李春桃; 唐苏婷; 徐云柯; 高源; 郭勇; 方超; 喻淋淋^*

来源：中国比较医学杂志, 2021, 31(10): 68-75.

• miR-16-5p
• NLRP1
• 缺氧复氧
• BRL-3A
• 焦亡

目的探讨mi R-16-5p对缺氧复氧诱导的大鼠正常肝细胞系BRL-3A焦亡的作用以及作用机制。方法通过细胞缺氧复氧的方法构建肝缺血再灌注损伤(HIRI)的体外模型,通过流式细胞术检测细胞焦亡率;通过荧光实时定量PCR(RT-qPCR)检测mi R-16-5p的表达水平;运用mi R-16-5p mimic在细胞中过表达mi R-16-5p并研究mi R-16-5p对细胞焦亡的影响;通过蛋白免疫印迹实验(Western blot)检测焦亡相关蛋白caspase1、IL-1β、IL-18的蛋白表达水平;通过生物信息学分析和双荧光素酶报告基因实验预测并鉴定mi R-16-5p与NLRP1的靶向关系;通过过表达和干扰NLRP1,研究NLRP1及mi R-16-5p/NLRP1轴对细胞焦亡的影响。结果与空白对照组相比,模型组焦亡率极显著上升(P<0.01),mi R-16-5p表达量显著降低(P<0.05)。过表达mi R-16-5p极显著抑制细胞焦亡(P<0.01)并抑制焦亡相关蛋白caspase1、IL-1β、IL-18的表达(P<0.01或P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验显示NLRP1是mi R-16-5p的靶基因,过表达mi R-16-5p显著降低了NLRP1的m RNA和蛋白水平(P<0.01或P<0.05)。此外,过表达NLRP1逆转了mi R-16-5p对细胞焦亡的抑制作用(P<0.01)和对caspase1、IL-1β、IL-18表达的抑制作用(P<0.01或P<0.05)。结论 MiR-16-5p通过靶向NLRP1来抑制caspase1、IL-1β、IL-18的表达,从而改善缺氧复氧引起的BRL-3A细胞焦亡。

• 单位
  西南医科大学