SiRNA干扰对高糖环境下大鼠肾小管上皮细胞Toll样受体4/转接子髓分化因子88信号通路的影响

作者：吕金雷; 杨玉娟; 吕柳青; 王瑜; 杨柳; 陈钦开; 时军

来源：中华肾脏病杂志, 2013, 29(11): 837-841.

• 高糖
• 血管紧张素Ⅱ
• 小干扰RNA
• TLR4信号
• 细胞因子

目的通过siRNA(RNAi)干扰选择性下调TLR4基因的表达,探讨高糖对大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)及其转接子髓分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)和炎性因子分泌的影响。方法设计并合成3对针对大鼠TLR4基因的特异性siRNA片段,以带有红色荧光的BLOCK-IT Alexa Fluor作为阴性对照,荧光显微镜下观察细胞转染效率,实时定量PCR检测TLR4 mRNA的表达变化。挑选基因沉默效率最佳的siRNA用于进一步实验,细胞被分5组:(1)正常糖对照组(NG);(2)高糖组(HG);(3)HG+血管紧张索Ⅱ(AngⅡ)+空转组;(4)HG+AngⅡ+siRNA组;(5)HG+AngⅡ+厄贝沙坦(lrB)组。采用实时定量PCR法检测TLR4、MyD88 mRNA的表达,Western印迹检测TLR4、MyD88及核因子kappa B(NF-kB)蛋白表达;ELISA法检测巨噬细胞趋化蛋白1(MCP-1)、白细胞介索6(IL-6)的表达。结果与NG组比较,高糖组TLR4/MyD88 mRNA及TLR4、MyD88、NF-kB蛋白表达水平明显上调(均P<0.01),细胞上清MCP-1、IL-6水平亦升高(P<0.01);空转组与高糖组比较差异无统计学意义(P>0.05);SiRNA组、ARB组TLR4、MyD88 mRNA明显下调,TLR4、MyD88及NF-kB蛋白明显下调,MCP-1、IL-6表达亦下调(均P<0.01)。结论高糖上调小管上皮细胞TLR4/MyD88信号及炎性细胞因子表达,AngⅡ可增强此效应:特异性基因沉默可阻断由高糖及AngⅡ诱导的TLR4信号通路的激活,并下调炎性介质的释放;TLR4信号通路在高糖、高肾素环境肾小管上皮细胞炎性反应机制中发挥关键作用。

• 单位
  湖北省黄石市二医院; 南昌大学